تقييم الفعالية الضد مايكروبية لإنزيم تخثر البلازما المنقى جزئياً والمعزول من المكورات العنقودية الذهبية

الباحث

نور صباح هادي

المشرف

إنتصار حسين علي

الجامعة

الجامعة التكنولوجية

الكلية / القسم

قسم العلوم التطبيقية / التقنيات الأحيائية

الشهادة

ماجستير

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

إنزيم تخثر البلازما; المكورات العنقودية الذهبية; الفعالية الضد مايكروبية; تنقية الإنزيم

لغرض دراسة التطبيقات الطبية لأنزيم مخثر البلازما المنتج والمنقى من بكتريا المكورات Aya ial جمعت 100 عينة سريرية من اعمار تتراوح ما بين (18-45) سنة ولكلا الجنسين من مستشفيات الواسطي والكندي، تضمنت مسحات من الحروق والجروح؛ بالإضافة الى عينات من IW وجد ان 7446 من العينات موجبة للزرع البكتيري 5 26% اعطت نتيجة سالبة ، 70.2746 من العزلات موجبة لصبغة كرام و29.7340 سالبة للصبغة GUIS عدد GY je المكورات العنقودية التي تم الحصول عليها 23 عزلة (14عزلة) سالبة لانتاج انزيم مخثر البلازما بينما 39.14% (9 (SY Je كانت موجبة لانتاج الانزيم, شخصت البكتريا مظهريا ومجهريا وبجهاز .Vitek2 system عند دراسة حساسية العزلات للمضادات Ay gall كانت اعلى حساسية للمضادات الحيوية هي لمضاد السبروفلوكساسين GY je 7 Cus حساسة من أصل 9، بينما الأقل حساسية لمضادات السفترياكزون والاوكزاسلين حيث جميعها كانت مقاومة. وعند دراسة تأثر إنتاجية العزلات لإنزيم مخثر البلازما بنوع الوسط الزرعيء كانت اعلى إنتاجية على وسط Leis Chemically defined media اقل إنتاجية على وسط المرق المغذي. اما بالنسبة لانتاجية العزلات لإنزيم مخثر البلازما عند درجات حرارة مختلفة، كانت اعلى إنتاجية للإنزيم عند Ap yo حرارة 37 Ay ge بينما كانت اقل إنتاجية عند درجة حرارة 25مئوية. وعند دراسة الإنتاجية عند درجات مختلفة للاس الهيدروجيني؛ كانت اعلى إنتاجية عند الاس الهيدروجيني 7.5 Lain اقل إنتاجية كانت عند A عند دراسة إنتاجية OY jell لإنزيم fide البلازما عند فترات حضانة مختلفة، كانت اعلى إنتاجية بعد 24 ساعة حضن بينما اقل إنتاجية كانت بعد 48 ساعة. وعند دراسة إنتاجية العزلات لإنزيم مخثر البلازما عند إضافة بلازما مخففة كمحفزء كانت اعلى إنتاجية عند تخفيف البلازما 0.2 بينما اقل إنتاجية عند تخفيف البلازما 0.125. وكانت اعلى إنتاجية للإنزيم عند استخدام املاح كلوريد المغنسيوم, بينما اقل إنتاجية عند استخدام املاح كلوريد الصوديوم. أظهرت نتائج تنقية إنزيم ال Staphylocoagulase المستخلص من بكتريا المكورات العنقودية الذهبية باستخدام كبريتات الامونيوم أن الفعالية النوعية كانت 2.1 وحدة/ملي غرام بروتين، وأن أفضل نسبة إشباع كانت 9680 وبعدد مرات تنقية 2.1 وحصيلة إنزيمية 12.9 % وأظهرت نتائج التنقية بإستخدام الديلزة أن الفعالية Are gill كانت 2.6 وحدة/ملي غرام بروتين وعدد مرات التنقية 2.2 والحصيلة الانزيمية %12.9 أظهرت نتائج التنقية بإستخدام عمود التبادل الايوني Cellulose-DEAE أن الفعالية النوعية كانت 70 وحدة/ملي al ye بروتين، وعدد مرات التنقية 58.33 والحصيلة االانزيمية 16.93 96 وأظهرت نتائج التنقية ee ee ee: وحدة/ملي غرام بروتين 813 Aue sill أن الفعالية Sephadex G-100 بإستخدام عمود الترشيح الهلامي . 90 17.42 وعدد مرات التنقية 677.5 وبحصيلة انزيمية للإنزيم، تراوحت (MLC) والتراكيز القاتلة الأدنى (MIC) عند دراسة الحد الأدنى من التراكيز المثبطة / التركيزات المثبطة الدنيا لجميع المضادات الحيوية المستخدمة أثناء الدراسة بين 1_16 ميكروجرام لمستخلص انزيم مخثر البلازما 0.5_8 ميكروجرام / مليليتر. MIC مليليتر، بينما تراوحت كانت الأكثر حساسية لمستخلص إنزيم التخثر بسبب انخفاض تركيز هذا Klebsiella pneumoniae و Pseudomonas aeroginosa 245 jis لقتلها LIS المضاد للميكروبات (1 ميكروغرام / مليليتر) كان ميكروغرام / مليليتر) يمكن 32) coagulase حيث ارتفاع تركيز مستخلص إنزيم Candida albicans أن يقتلها. Pseudomonas (بعد 448%( ل coagulase لمستخلص إنزيم MBC / MIC من خلال نسبة كانت تساوي 4 و 2 ل Enterococcus faecalis و Escherichia coli 3 aeruginosa كان له تأثير قاتل coagulase يمكننا أن نستنتج أن مستخلص إنزيم Klebsiella pneumoniae MFC / لأن نسبة ), albicans تأثير قاتل للفطريات على Coagulase للجراثيم. وكان لمستخلص إنزيم .MIC =4 تم تقييم النشاط التآزري لمستخلص إنزيم مخثر البلازما النقي بالاشتراك مع عدد من المضادات الحيوية عن تأثيرًا تآزريًا لمزيج 1. faecalis و P.aeruginosa SY je طريق قياس منطقة طريقة التثبيط، أظهرت K, على التوالي ، لكن عزلات Vancomycin ، Gentamycin و Coagulase من خلاصة إنزيم و Coagulase أظهرت تأثيرًا مضادًا لتوليفة مستخلص إنزيم ) albicans و E.coli 3 pneumoniae Fluconazole و Gentamycin لبلبهع ع ع تت خ (SO

For the purpose of studying the medical applications of purified and produced plasma thrombin enzyme from Staphylococcus aureus bacteria, 100 clinical samples were collected from both genders between the ages of 18-45 from Al-Wasiti and Al-Kindi hospitals. These samples included swabs from burns and wounds, as well as urine samples. It was found that 9 isolates of Staphylococcus aureus were producing the plasma thrombin enzyme. The bacteria were identified morphologically and microscopically, and were diagnosed using the Vitek2 system. When studying the isolates' sensitivity to antibiotics, the highest sensitivity was observed to ciprofloxacin, where 7 out of 9 isolates were sensitive, while the least sensitivity was observed to cephradine and oxacillin, where all isolates were resistant. Regarding the isolates' production of plasma thrombin enzyme on various culture media, the highest production was observed on Chemically Defined Media (CDM), while the lowest production was observed on Nutrient Broth (NB). Regarding the isolates' production of coagulase enzyme at different temperatures, the highest production was observed at 37°C, while the lowest production was observed at 25°C. Additionally, when studying the production at different pH levels, the highest production was observed at pH 7.5, while the lowest production was observed at pH 4. In present study, the productivity of the isolates for the coagulase enzyme at different incubation periods,investigated the highest productivity was after 24 hours of incubation, while the lowest was after 48 hours. When studying the productivity of the isolates for the coagulase enzyme with the addition of a reducing enzyme as a catalyst, the highest productivity was when plasma was diluted 0.5, while the lowest was when it was diluted 0.8. The highest productivity of the enzyme was observed when using magnesium chloride salts, while the lowest productivity was observed when using sodium chloride salts. The results of purifying Staphylocoagulase enzyme extracted from Staphylococcus aureus bacteria using ammonium sulfate showed a specific activity of 2.1 units/mg protein, with the best saturation percentage of 80%, after 2.1 purification cycles and an enzyme yield of 12.9 %. The purification results using dialysis showed a specific activity of 2.6 units/mg protein, after 2.2 purification cycles and an enzyme yield of 12.9 %. The purification using Cellulose-DEAE ion exchange column showed a specific activity of 70 units/mg protein, after 58.33 purification cycles and an enzyme yield of 16.93 %. The purification using Sephadex G-100 gel filtration column showed a specific activity of 813 units/mg protein, after 677.5 purification cycles and an enzyme yield of 17.42 %. When studying the minimum lethal concentrations (MLC) and minimum inhibitory concentrations (MIC) of the enzyme, the minimum inhibitory concentrations for all antibiotics used during the study ranged from 1-16 micrograms/milliliter, while the MIC for coagulase enzyme extract ranged from 0.5-8 micrograms/milliliter. Klebsiella pneumoniae showed the highest sensitivity to the coagulase enzyme extract due to the low concentration of this antimicrobial agent (1 microgram/milliliter) being sufficient to kill it compared to Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans, where a higher concentration of coagulase enzyme extract (32 micrograms/milliliter) could kill them. By using the MBC/MIC ratio for the coagulase enzyme extract against Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, and Enterococcus faecalis, which was equal to 4 for all three, and 2 for Klebsiella pneumoniae, it can be concluded that the coagulase enzyme extract had a bactericidal effect. The coagulase enzyme extract also had a fungicidal effect on C. albicans, as the MFC/MIC ratio was equal to 4. The synergistic activity of pure Staphylocoagulase enzyme extract in combination with several antibiotics was evaluated using the inhibition zone assay. Isolates of P. aeruginosa and E. faecalis showed a synergistic effect with a combination of Coagulase enzyme extract and Gentamycin, followed by Vancomycin. However, isolates of K. pneumoniae, E. coli, and C. albicans showed an antagonistic effect with a combination of Coagulase enzyme extract, Gentamycin, and Fluconazole.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب