إكثار المورينجا Moringa oleifera Lam. خارج الجسم الحي وتقدير الثبات الوراثي للنباتات الناتجة ومحتوياتها من بعض المواد الكيميائية

الباحث

آلاء عمر أحمد الحامدي

المشرف

صمود حسين الحديدي - عمار زكي قصاب باشي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية الزراعة والغابات / علوم الغابات

الشهادة

دكتوراه

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

المورينجا; الإكثار النسيجي; الثبات الوراثي; المركبات الكيميائية

نفذت الدراسة في مختبر زراعة الخلايا والأنسجة النباتية التابع لقسم علوم الغابات في كلية الزراعة والغابات / جامعة الموصل للفترة من آذار / 7٠١7١ - أيلول / ٠١77 بهدف التوصل إلى أفضل المعاملات لإكثار شجرة المورينكا Moringa 011/270 Lam. بإستعمال تقانة الزراعة النسيجية. خلال مرحلة النشوء دُرِسَ تأثير غمر البذور المنزوعة الغلاف في محلول القاصر التجاري (محلول فاس إنتاج شركة بابل للمنظفات المحتوي على 0.6/ هايبوكلورات الصوديوم) بتراكيز مختلفة )5 106، 15) / ولفترات زمنية مختلفة (20: 25، 30( دقيقة وبعد مرور أربع أسابيع من زراعة البذور على الوسط الغذائي MS الخالي من منظمات النمو أخذت القراءات، بينت النتائج بأن معاملة غمر البذور ب 210 محلول القاصر التجاري أعطت أقل نسبة مئوية للبذور الملوثة )20( ونسبة مئوية للبذور النامية )7100( بغض النظر عن فترات الغمر. أما فيما يخص مرحلة التضاعف فأجريت تجاربها بطريقتين مختلفتين، الطريقة الأولى التضاعف المباشر بإستخدام العقد المفردة أو الفلق، الطريقة الثانية التضاعف غير المباشر عن طريق استحداث الكالس من أجزاء نباتية مختلفة ثم تمايزه، في الطريقة الأولى (التضاعف المباشر) أجريت عدة تجارب في الأولى والثانية Gad تأثير إضافة تراكيز مختلفة (0.0، 0.25، 0.5، 0.75، 1.0( ملغم.لتر | من BA أو تراكيز مختلفة (0.0: 1.0، 2.0، 3.0، 4.0( ملغم.لتر ' من Kin وتداخلاتها في تضاعف العقد المفردة على الوسط الغذائي MS أو على الوسط الغذائي WPM أوضحت نتائج التجربة الأولى والثانية BA ob أكثر تأثيراً من Kin في إحداث التضاعفء gly الوسط MS أفضل من الوسط WPM وأن أفضل وسط لتضاعف العقد هو وسط MS المجهز ب 0.75 ملغم.لتر ' BA مع 4.0 ملغم.لتر ' ،Kin إذ bel أكبر عدد أفرع (19.6 فرع.عقدة ( وأكبر عدد أوراق (82.9 ورقة.عقدة ') متفوقاً معنوياً على معظم المعاملات الأخرى. بناءً على نتائج تجارب التضاعف المباشر الأولى والثانية تم إنتخاب الوسط الأكثر تأثيراً في التضاعف (الوسط الغذائي MS المجهز ب 0.75 ملغم.لتر * 84 مع 4.0 ملغم.لتر ' (Kin لتنفيذ تجارب التضاعف المباشرة اللاحقة، إذ دُرِسَ في التجربة الثالتة تأثير إضافة تراكيز مختلفة (0.0, 0.25، 0.5، 1.0( ملغم.لتر ' من الأوكسينات IAA أو IBA أو NAA وتداخلاتها إلى الوسط المنتخب من تجارب التضاعف المباشر وبعد مرور Gla أسابيع من الزراعة أخذت القراءات ولم تظهر النتائج أي زيادات معنوية في قيم الصفات المدروسة. 2 PE في التجربة الرابعة دُرِسَ تأثير إضافة حامض الساليسليك بالتراكيز (0.0: 1.0، 2.0، 23.0 4.0( ملغم.لتر ' إلى الوسط الغذائي المنتخب للتضاعف المباشر في تضاعف العقد المفردة وبعد مرور ثمانٍ أسابيع من الزراعة أخذت القراءات، أظهرت النتائج تثبيط معنوي في صفات عدد الأفرع وعدد الأوراق بغض النظر عن التراكيز المدروسة. في التجربة الخامسة والسادسة دُرِسَ تأثير إضافة تراكيز مختلفة (0.0, 22.0 4.0 6.0، 8.0( ملغم.لتر ' من الحامض الأميني ميثيونين أو أسباراجين كلا على إنفراد وعلى التوالي إلى الوسط المنتخب للتضاعف المباشر في تضاعف العقد المفردة وبعد مرور ثمان أسابيع من الزراعة أخذت القراءات، أظهرت النتائج ob إضافة 6.0 ملغم.لتر ' ميثيونين أو 8.0 ملغم.لتر * أسباراجين أعطت أعلى القيم لعدد الأفرع )23.5 فرع.عقدة ! و 25.4 فرع.عقدة ') وأعلى عدد أوراق )116.1 ورقة.عقدة ' و130 ورقة.عقدة ') على التوالي متفوقاً معنوياً على بعض المعاملات الأخرى؛ ومن ضمنها معاملة المقارنة. استخدمت في تجارب التضاعف المباشر (الأولى والثانية) عقد مفردة بطول 1سم جهزت من بادرات ناتجة من مرحلة النشوء بعد مرور 21 يوم من زراعة البذور في وسط SR MS من منظمات النمو. أما خلال التجارب (الثالثة - السادسة) أستخدمت العقد المفردة الناتجة من النبيتات النامية على وسط التضاعف المباشر المنتخب. في التجربة السابعة Gud تأثير إضافة تراكيز مختلفة (0 ، 5 ، 10 6 15 6 20) مل.لتر ' من حليب جوز الهند إلى الوسط الغذائي المنتخب MS) + 0.75 ملغم.لتر | BA + 4.0 ملغم. لتر ' (Kin في توالد الأفرع من الفلق وبعد مرور عشرة أسابيع من الزراعة أخذت النتائج، علماً بأن lal زرعت خلال الست أسابيع الأولى في وسط حاوي حليب جوز الهند ومنظمات النمو والأربع أسابيع التالية في وسط خالٍ من حليب جوز الهند ومنظمات النمو، أوضحت النتائج بأن حليب جوز الهند سبب alld الأفرع من الفلق بغض النظر عن التراكيز المضافة منه إلى الوسط الغذائي، علماً ob أكبر عدد من الأفرع )3.9 فرع.فلقة ') وأكبر عدد من الأوراق (19.3 ورقة.فلقة ') تكون من lal المزروعة في الوسط المنتخب المجهز ب 15 مل.لتر ' حليب جوز الهند متفوقاً معنوياً على معظم المعاملات الأخرى. أما فيما يخص طريقة التضاعف الثانية (التضاعف غير المباشر عن طريق إستحداث الكالس وتمايزه) أجريت عدة تجارب في الأولى God تأثير إضافة تراكيز مختلفة )0.0، 0.1 0.5¢ ، 1.0، 2.0( ملغم.لتر ' من (2,4-1 إلى الوسط الغذائي MS في استحداث الكالس من أجزاء نباتية مختلفة (قمم نامية، عقد مفردة، سويقات جنينية علياء سويقات جنينية سفلى ههج ببيش اضة 23333 يس بطول 1 سم تقريباً) وأجزاء من (نصل الورقة أو الفلق بأبعاد 1 “ 1 سم تقريباً لكل ،(Lede أوضحت النتائج بأن جميع الأجزاء النباتية إستجابت لإستحداث الكالس وأن أعلى نسبة مئوية لإستحداث الكالس )780( حصلت من الفلق في المقابل لم تنجح الأجزاء النباتية المزروعة في الأوساط الخالية من (2,4-1 في استحداث ،Gull! في حين أعطت الأجزاء النباتية المزروعة في الاوساط المجهزة ب 1 ملغم.لتر ' (2,4-1 أعلى dus مئوية لإستحداث الكالس (4100)، وكذلك أعلى وزن رطب للكالس )2.4 غم) منفوقاً معنوياً على جميع معاملات التداخل الاخرى. أما في التجربة الثانية Gud تأثير إضافة NAA بنفس التراكيز إلى الوسط الغذائي MS وبعد مرور ثلاث أسابيع أخذت القراءات. أظهرت نتائجها قلة قدرة تراكيز NAA على استحداث الكالس مقارنة مع ([-2,4. في التجربة الثالثة درس تأثير إضافة تراكيز مختلفة (20 ، 230 40) غم لتر ' من السكروز إلى الوسط الغذائي الأمثل لإستحداث الكالس والمنتخب من تجارب الإكثار غير المباشر الأولى والثانية (وسط MS + 0.1 ملغم.لتر ' (2,4-D لإستحداث الكالس من opal النباتي الأكثر إستحداتاً للكالس (القمم النامية) وبعد مرور ثلاث أسابيع أخذت القراءات، بينت النتائج أن الوسط الغذائي المجهز ب 40 غم سكروز أعطي أعلى وزن طري للكالس (1.5 غم) aly يفرق معنوياً عن وزن الكالس الرطب المستحدث في الوسط الغذائي المجهز ب 30 غم سكروز والذي بلغ 1.2 غم. في التجارب الرابعة والخامسة دُرِسَ مدى استجابة الكالس المستحدث من القمم النامية على الوسط الأمثل لإستحداث الكالس على التمايز عند زراعته على وسط MS مجهز بتراكيز مختلفة من BA (0.0 ، 0.25، 0.5، 1.0، 2.0( ملغم.لتر ' (التجربة الرابعة) أو ٠ 0.5 <0.0) Kin 1.0، 2.0، 3.0) ملغم.لتر ' (التجربة الخامسة) وأخذت القراءات بعد مرور ست أسابيع من زراعة الكالس على أوساط التمايزء أوضحت النتائج تفوق BA على Kin في تمايز ،Gull إذ بلغت أعلى نسبة مئوية لقطع الكالس التي كونت dial جسمية 730 بمعدل )2 جنين جسمي لكل قطعة كالس) وأعلى نسبة مئوية للأجزاء التي كونت براعم )270( بمعدل (8 برعم لكل قطعة كالس) في الأوساط المجهزة ب 2.0 ملغم.لتر ' BA في التجربة السادسة Guyd تأثير إضافة تراكيز مختلفة (0 ، 5 ، 10 ، 15 ، 20) مل.لتر ' من حليب جوز الهند إلى الوسط الغذائي المنتخب من تجارب التضاعف المباشر الأولى والثانية MS) + 0.75 ملغم.لتر ' BA + 4.0 ملغم.لتر ' (Kin في استحداث الكالس من الفلق وتمايزه وبعد مرور عشرة أسابيع من الزراعة أخذت النتائج، خلال الست أسابيع الأولى زرعت الفلق في وسط يحوي حليب جوز الهند ومنظمات النموء بعدها نقلت للنمو لمدة أربع أسابيع لاحقة في وسط سس 22222222 OC JL MS من حليب جوز الهند ومنظمات النمو، أوضحت النتائج Gb جميع تراكيز حليب جوز الهند المضافة إلى الوسط الغذائي سببت نشوء الكالس في حين لم تنجح معاملة المقارنة (خالية من حليب جوز الهند) في استحداث الكالس. أما بالنسبة لوزن الكالس الرطب الناشئ على الجزء النباتي فإن أعلى وزن للكالس بلغ 3.4 غم وتم الحصول عليه من معاملة إضافة 15 مل حليب جوز الهند إلى الوسط الغذائي وبتفوق معنوي على معاملة المقارنة ومعاملة إضافة 5 مل حليب جوز الهند. فيما يخص مرحلة التجذير دُرِسَ تأثير إضافة تراكيز مختلفة (0.0, 0.25، 60.5 0.75، 1.0) ملغم.لتر ' من الأوكسينات IBA و NAA و USTAA على انفراد إلى الوسط الغذائي MS بنصف تركيز املاحه في تجذير الأفرع الناتجة من الوسط الغذائي المنتخب MS) + 0.75 ملغم.لتر ' BA + 4.0 ملغم.لتر ' Kin ) لمرحلة التضاعف بعد توحيد أطوالها إلى 2 سم وعدد أوراقها إلى ثلاثة أوراق. بعد مرور أربع أسابيع من الزراعة أخذت القراءات، أوضحت النتائج oh أعلى نسبة مئوية للتجذير )7100( وأعلى عدد جذور (11.9 جذر.فرع مجذر ') وأعلى طول للجذور (3.9 سم) تم الحصول عليها من إضافة 18/4 إلى الوسط الغذائي وبتفوق معنوي على NAA وأن أكبر نسبة مئوية للتجذير وأكبر عدد للجذور تم الحصول عليها من إضافة 1.0 ملغم.لتر ' 18.4 إلى الوسط الغذائي. حُضنت الزروعات في جميع التجارب في غرفة التنمية تحت ظروف مسيطر عليها من درجة حرارة )22 +2 2°( وضوء (شدة إضاءة بمقدار 2000 لوكس ناتجة من أنابيب الفلورسنت البيضاء) وبتعاقب ضوئي 16 ساعة ضوء يتبعها 8 ساعات ظلام يومياً. أما بالنسبة لمرحلة أقلمة النبيتات فأوضحت النتائج بعد مرور أربع أسابيع من بدأ عملية الأقلمة بأن جميع النبيتات المعاملة بالاوكسينات لتجذيرها بغض النظر عن نوع وتركيز الأوكسين المستخدم نجحت في البقاء على قيد الحياة وأعطت نسبة نجاة 67100 في المقابل أعطت نبيتات معاملة المقارنة نسبة نجاة 80/. أظهرت بيانات الترحيل الكهربائي في الأكاروز للحامض النووي المعزول من أنسجة شجرة المورينكا وجود تطابق وراثي ما بين النباتات الأم والنباتات الناتجة من تضاعف العقد المفردة على الوسط الغذائي الأفضل للتضاعف المباشر MS المجهز بتداخل 0.75 ملغم.لتر' BA مع 4.0 ملغم.لتر ' Kin ونباتات ناتجة من استحداث الكالس الناتج من زراعة القمة على الوسط الغذائي MS المجهز ب 0.1 ملغم.لتر | 2,4-D ومن ثم تمايزه على وسط MS مجهز ب 2.0 ملغم. لتر BAY ل

The study was carried out in the Laboratory of Plant Cells and Tissue Culture of the Department of Forestry Sciences at the College of Agriculture and Forestry / University of Mosul for the period from March / 2021 - September / 2022 with the aim of finding the best treatments for the propagation of the Moringa oliefera Lam. tree using tissue culture technology. During the Initiation Stage, the effect of immersing the peeled seeds in Commercial bleach solution (FAS solution produced by Babel Detergent Company containing 0.6% sodium hypochlorite) in concentrations (5, 10, and 15) % and for different periods (20, 25, and 30) minutes was studied. After four weeks of cultivating the seeds on MS medium free growth regulators, the results were obtained, the results showed that the treatment of seed soaking with 10% sodium hypochlorite gave the highest percentage of healthy seeds (100%) and gave a percentage of developing seeds (100%) regardless of the soaking period. As for the multiplication stage, its experiments were conducted in two different ways. The first method was direct multiplication using single nodes or cotyledons. The second method was indirect multiplication by creating callus from different plant parts and then differentiating it. In the first method (direct multiplication), several experiments were conducted in the first and second. The effect of adding different concentrations (0, 0.25, 0.5, 0.75, 1.0) mg.l-1 of BA or different concentrations (0.0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0) mg.l-1 of Kin and its interactions in the multiplication of single nodes are multiplied on the MS medium or on the WPM medium, the results of the first and second experiment showed that BA is more effective than Kin in multiplication events, and that the MS medium is better than the WPM medium, and that the best medium for multiplication is MS medium equipped with 0.75 mg.l-1 BA with 4.0 mg.l-1 Kin, as it gave The largest number of shoots is 19.6 shoots.nodes-1, and the largest number of leaves is 82.9 leaves.nodes-1, significantly superior to most other treatments. Based on the results of the first and second direct multiplication experiments, the medium most effective in multiplication was chosen (MS medium prepared with 0.75 mg.l-1 BA with 4.0 mg.l-1 Kin) to carry out subsequent direct multiplication experiments, as the effect of adding different concentrations was studied in the third experiment (0.0, 0.25, 0.5, 1.0) mg.l-1 of the auxins IAA, IBA, or NAA and their interactions with the medium selected from the direct multiplication experiments. After eight weeks of ____ cultivation, the results were taken, and the results did not show any significant increases in the values of the studied traits. In the fourth experiment, the effect of adding salicylic acid in concentrations (0.0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0) mg.l-1 to the optimum nutrient medium (MS + 0.75 mg.l-1 BA + 4.0 mg.l-1 Kin) in the multiplication of single nodes was studied. After eight weeks of cultivation, the results were taken; the results showed a significant inhibition in the characteristics of the number of shoots and the number of leaves, regardless of the concentrations studied. In the fifth and sixth experiment, the effect of adding different concentrations (0.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0) mg.l-1 of the amino acid methionine or asparagine separately to the optimal medium (MS + 0.75 mg.l-1 BA + 4.0 mg.l-1 Kin) in multiplication of single nodes was studied. After eight weeks of cultivation, the results were taken. The results showed that the addition of 6.0 mg.l-1 methionine or 8.0 mg.l-1 asparagine gave the highest values for the number of shoots (23.5 shoots.node-1 and 25.4 shoots.node-1) and the highest number of leaves (116.1 leaves.node-1 and 130 leaves.node-1), respectively morally on some other transactions, including the comparative treatment. In the direct multiplication experiments (first and second), single nodes of 1 cm length were used, prepared from seedlings resulting from the initiation stage after 21 days of seed cultivation in MS medium devoid of growth regulators. As for the experiments (third - sixth), single nodes resulting from plants growing on the selected direct multiplication medium were used. In the seventh experiment, the effect of adding different concentrations (0, 5, 10, 15, and 20) ml.l-1 of coconut milk to the optimum nutritional medium (MS + 0.75 mg.l-1 BA + 4.0 mg.l-1 Kin) on reproduction the shoots of the cotyledon was studied. After ten weeks of cultivation, the results were taken, noting that the cotyledons were grown during the first six weeks in a medium containing coconut milk, and the following four weeks in a medium free of coconut milk and growth regulators, the results showed that coconut milk caused the reproduction of shoots from cotyledons regardless of the concentrations added to the nutrient medium, noting that the largest number of shoots (3.9 shoots.cotyledons-1) and the largest number of leaves (19.3 leaves.cotyledon-1) formed from cotyledons planted in the optimum medium supplemented with 15 ml.l-1 coconut milk. As for the second method of multiplication (indirect multiplication by initiation and differentiation), several experiments were conducted. In the first one, the effect of adding ____ different concentrations (0.0, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0) mg.l-1 of 2,4-D to the MS medium was studied in the callus induction from explants (apical buds, single nodes, epicotyls, hypocotyl, about 1 cm long) and parts of (leaf blade and cotyledons with dimensions of approximately 1 x 1 cm). Three weeks later I took the readings. The results showed that all explants responded to callus induction and that the highest percentage of callus induction (80%) was obtained from cotyledon. Media supplemented with 0.1 mg.l-1 2,4-D had the highest percentage of callus induction (100%) as well as the highest callus wet weight (2.4 g) significantly superior to all other interference treatments except for 0.5 mg.l-1 2,4-D treatment. In the second experiment, the effect of adding NAA at the same concentrations to the MS diet was studied, and after three weeks the readings were taken. Their results showed that NAA concentrations were less able to induce callus compared with 2,4-D. In the third experiment, the effect of adding different concentrations (20, 30, 40) gm.l-1 of sucrose to the optimal nutrient medium for callus creation selected from the first and second experiments (MS + 0.1 mg.l-1 2,4-D) was studied to callus induction from the apical buds. After three weeks had passed, the readings were taken; the results showed that the nutrient medium supplemented with 40 g sucrose gave the highest fresh weight of callus (1.5 g). It was not significantly different from the weight of wet callus induction in the nutrient medium supplemented with 30 g sucrose, which was 1.2 g. In the fourth and fifth experiments, he studied the extent of the response of callus created from the apical buds on the optimal medium for callus creation on differentiation when cultured on MS medium equipped with different concentrations of BA (0.0, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0) mg.l-1 (the fourth experiment) or Kin (0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0) mg.l-1 (the fifth experiment). The readings were taken six weeks after culture of the callus on differentiation media, the results showed the superiority of BA over Kin in callus differentiation, and the highest percentage of callus segments that formed somatic embryos was 30% (2 somatic embryos per callus segment) and the highest percentage of parts that formed buds (70%) with an average of (8 buds per callus piece) in the media treated with 2.0 mg.l-1 BA. In the sixth experiment, the effect of adding different concentrations (0, 5, 10, 15, 20) ml.l-1 of coconut milk to the selected medium from the first and second direct multiplication experiments (MS + 0.75 mg.l-1 BA + 4.0 mg.l-1 Kin) was studied. In the development of callus from the cotyledons and their differentiation, and after ten weeks of cultivation, the results were taken. During the first six weeks, the cotyledons ____ were planted in a medium containing coconut milk and growth regulators, after which they were transferred to growth for a subsequent four weeks in MS medium devoid of coconut milk and growth regulators. The results showed that all the concentrations of coconut milk added to the diet caused the formation of calluses, while the control treatment (without coconut milk) did not succeed in creating calluses. As for the weight of wet callus arising on the plant part, the highest callus weight was 3.4 gm, which was obtained from the treatment of adding 15 ml of coconut milk to the nutrient media, with a significant superiority over the comparison treatment and the treatment of adding 5 ml of coconut milk. In the rooting stage, the effect of adding different concentrations (0.0, 0.25, 0.50, 0.75, 1.0) mg.l-1 of the auxins IBA, NAA and IAA each separately to the MS nutrient media with half the concentration of its salts was studied in the rooting of the shoots from the optimal nutrient medium (MS + 0.75 mg.l-1 BA + 4.0 mg.l-1 Kin) for the multiplication stage after unifying their lengths to 2 cm and the number of leaves to three leaves. Four weeks after cultivation, the readings were taken, the results showed that the highest percentage of rooting (100%), the highest number of roots (11.9 root.branch rooted-1), and the highest length of roots (3.9 cm) were obtained from the addition of IBA to the nutrient medium with a significant superiority over NAA and that the largest percentage of rooting and the largest number of roots were obtained from the addition of 1.0 mg.l-1 IBA to the nutrient medium. The cultures for all stages of the study were incubated in the culthure room at a temperature of 22 ± 2 C and a light intensity of 2000 lux, supplemented with white fluorescent tubes, with a light sequence of 16 hours of light, followed by 8 hours of darkness / day. As for the stage of acclimatization of the plants, the results showed that after four weeks of acclimation they were sufficient to obtain a 100% survival rate regardless of the type and concentration of the growth regulator used to root them with it, while the comparison treatment achieved a survival rate of 80%. The electrophoresis data of the agarose DNA isolated from the tissues of Moringa plant showed that there is a genetic correspondence between the mother plants and the plants resulting from the multiplication of single nodes on the MS nutrient medium equipped with an overlap of 0.75 mg.l-1 BA with 4.0 mg.l-1 Kin and plants resulting from callus induction. The resulting apical buds was grown on MS nutrient medium supplemented with 0.1 mg.l-1 2,4-D and then differentiated on MS medium supplemented with 2.0 mg.l-1 BA.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب