دراسة ارتباط الطفرات الأساسية لالتهاب الكبد الفيروسي نوع ب والأنماط الجينية مع مراحل مختلفة من التهاب الكبد الفيروسي ب المزمن

الباحث

ايه رائد عبدالوهاب الحياني

المشرف

شذى فاروق عبدالله

الجامعة

جامعة بغداد

الكلية / القسم

الطب / الأحياء المجهرية

الشهادة

دكتوراه

السنة

2022

لغة الرسالة

انكليزي

الكلمات المفتاحية

Hepatitis B virus;Core mutations;Genotypes;Chronic hepatitis B

التهاب أُلكَبَدٍ الفيروسي ألمُزمِنُ هُوَ أحد أخطر Gal se الإصابّة Clg الكَبَّدٍ الفيروسي نوع ب و مَعَ أنَّ dis أَلإزْمَانِ تتناسبُ thse مَع ألغمر وَ لَكِنْ bad ألموث بألإصابة gi eh, سَرَطان ألكَبَدِ. إنَ Gaal) Sle Ad للمرضى مع فخص إِنْزيماتِ Jas Baby SS LOK الفايروس ESE مِنْ توقُع مُستقبلِيّة Ge pall وَأُسْتِجِابَتِهِ للعلاج. eS ِراسةٌ (الطفرات الاساسية As ) لِعَرضٍ atthe dd yee God eta sll خلال ألإصابّة بِمَرَض التهاب الكبد الفيروسي نوع ب خلال استمرار وجود الاصابة مَعَ انعدام دور آلِيَّةٍ قصجيح ألتجارب تَزيدُ نِسبَةٍ Ssh هذه ألطفراث ABI gh في الفايروس. وَأَشْهَرُ ألطّفرات ألورائيّة هي all تكونٌ call Ala الأساسي) Call, تَحدْثُ في مَناطِق( ماقَبَلْ اللْبي) cei lsh calls تكوين مستضد الفايروس نوع ي Uke التوالي ويشير هذا المستضد إلى ظاهرة أمنتنساخ dled وعلى 358 Adley Si لآخَرِيْنَ. GUS dats ألفايرؤس قد Cie) ألجهازٌ ألمَناعيَ وَيُساعِدُ عَلَى أستمراريّة ألإصابَة بالفايروس . GAS ألدراسة الحالِيّةُ هِذِهِ إِلَى تحديدٍ ألعلاقة بِينَ الطّفرات Lath لفايروس التهاب الكبد الفايروسي نوع ب وَبَينَ الانماط الجينية فِي Dal ye مُخَتَلِقَةٍ Gazal ألتهاب SS) الفيروسي oe all وتَحدِيدٍ stg وهذه Ai) ya لِمُقْتَطَفٍ fend gk ضَمّث تِمْعِينَ مَريضاً:(48)دَكرَأ و(42)أنثى جُمِعُوا من مستشفى أمراض ألجهاز ألهَضنمِي وَألكْبَدٍ Cee Rl فِئْ بَغداد Bl pate ob Ge oy أَلدِرَاسَةٌ فِي قسم الاحياء ألمجهريّة فِي كُلِيَةٍ الطب بجامعة بَغداد Le 5 fill بَيْنَ كانونَ atl )2020( وَآذارَ (2020).حيث Ge CAS! دم(5-10) مل وأستُخلِص منها البلازما Gh, في درجّة حرارة من(20-80) تحت الصفر ألمئويّ is! الاستعمال. أظهرزت ألمجِمُوعَةٌ ab ألدّزس تتيجة din gs للمستضد السطحي الخاص بالفايروس Sy اكثر من (6)أشهْرٍ oly تكن تحت تِأثِير أي ede مُضَادٍ للفايروسات. Cy gly فخوصاث )9 GSI ABS كفخص وظائف ألكْبَدِد وفخص ألمُؤشرات ألمَصلِيّة للفايروس. كذلك تم ألكشف Ge نسبة الفايروس في الدم و كذلك عَن الانماط الجينية بأجراءٍ فحص تفاعل البوليمراز المتسلسل .وَأخيرَاً إنّ ألعيّنات ألمُفرّزة ألخاصة بِ(جِيْنِ (ll وارسلت Subd Ge al الخاص بالقواعد النيتروجينية والترتيب. وفي هذه الدراسة GIS عدد ألمرضى الذين اظهروا عدم تكوين المستضد نوع ي هم (81) Ged (90) bs أي بنٍسبة )%90( اما من كان مُوجباً هم (9) مرضى مِنْ اصل )90( Lilie’ أي بنسبّة (9010). وقد كانت ALA علاقة مُهمّة بَيْنَ ألوضع ألمَصْلِي للمستضد نوع ي و نسبة الفايروس في ،(p=0.042) pall حَيْتُ SSI Gi مِنْ نِصْفٍ ألحالات )%55,6( كانت ذات مُستويات عالية مِنَ نسبة تركيز الفايروس في الدم اكثر من 2000 وحدة دولية في ملليتر الواحد 5 OS gall مِن المستضد المذكور اعلاه مُقارَنةٌ بنسبة (9024.7) مَعَ الحالات السالبة للمستضد وَلم يُلاحظ وُجُودَ أَخْتِلافٍ Gods Lad is yh gS وَضْعَ المستضد ي وَعِلاقَنُهُ بألدرامة ألإحصائيّةٍ (LB piss) وَصفات Bath ألأساسي le (Tas gl) 5 على Gs Gls العزلات التي سجلت تركيز الفايروس في الدم اكثر او يساوي 2000 وحدة دولية في المللتر الواحد سجلت (9/055.6) مع تكوين المستضد نوع ي مُقارَنة ب )%24,7( Als سالبة من ناحية المستضد اعلاه (0-0.042) وفي هذه ألدراسة لا توجّد أَهَمِيَة إحصائيّة [gad وكانَ النمط lal من نوع د و هو النمط Stull في (64) مِنْ (90)عَيْنَة أي بنسبّة (7071.1).بيئما Gils عَيّنات خَلِيطٍ نوع أ ود بنسبّة (702.2). وَكائت Als عِلاقَة Gb Alle Abed) GIS الانماط الجينية و نسبة الفايروس في الدم حيث كانت تساوي (p=0.0010) ولكن لَيْسَ LS هُوَ ألحال cod ألمَيَرَاتِ الأخرى. إِنَّ A عدم انتاج المستضد في مَرضى الانماط الجينية نوع د أعلى Let gli بمن هم اظهروا هذا المستضد كما لوحظ ان الفايروس من نوع البينة د يَكونُ مصحوبَّاً بأرتفاع انزيمات الكبد وكما يَلِي:(9020.3 & 023.4!).وَلهِدَا Gf Sad ألسَالبية ألمَصلية للمستضد نوع ي مِنْ بين ألحالات المدرومتة $B Ge USE ألطور ألهايد(التاكن) والطور الارتكاسي الفعال لالتهاب aS ألفيروسي (ب) ألمُزمِنْ. فإذا كان ألأخيرُ مَصحوباً esp فايروسي dle ولهذا يَستَوجِبُ إجراءُ دراساتٍ إضافيّة SS مِنْ وجود )5854 قَبْل (Al الإستنتاج: في ألختام نستنتجٌ أنَّ ما وَجِدنَاهُ من دراستِنًا يُشيرُ إلى Gi مُعظمَ ألمرضى المُصابين بالتهاب الكبد الفيروسي نوع ب كان لديهم المستضد نوع ي سالبا مع هيمنة االنوع الجيني نوع د وقد تم تعيين خمس طفرات فريدة في موضع القبل اللبي في عينة واحدة سالبة للمستضد ي و متزامنة الاصابة بالتهاب الكبد الفيروسي نوع د مع ارتفاع نسبة الفايروس في الدم وارتفاع في انزيمات الكبد وهذه الطفرات ادت الى غياب تكوين المستضد نوع ي .ومن بين(66)حالة موجبة للمستضد السطحي اضافة الى نسبة الفايروس في الدم كان هناك 35 عينة فقط هي موجبة لتفاعل البوليميراز المتسلسل الخاص بعزل جين اللب وعند اجراء التسلسل الاحماض النيتروجينية الخاصة في الجين المعزول )10( GY je فقط كانت كاملة المماثلة أؤ(0100؟)الى )97 %( و (4) عزلات جديدة Geog) Alas في( ألمركز GUGM Gib gh ألإحيائِيّة) edgy ألأرقام ألتعريفيّة: Ay149881,Ay149882,Ay149883 ,Ay149884) and accession numbers of (LC610896 ,LC610897, LC610898 LC610899) على التوالي. 5 في هذه الدراسة هناك غزلة واحدة Go سلسلة مُسجلة حَدِيثَاً وهي( (Ay149883,sr=LC610898 العائدة لطفرة وراثية في منطقة اللب من بين 35 عزلة وبنسبة 6 إن شجرة ألثتئوء ألسُلاليَ للجين المعزول انشأت باستعمال اربعة عزلات من هذه الدراسة ومقارنتها مع 19 عزلة اخذت من بنك الجينات. دراسة ارتباط الطفرات الاساسية لالتهاب الكبد الفيروسي نوع ب و الأنماط الجينية مع مراحل مختلفة من التهابات الكبد الفيروسي ب المزمن

Chronic Hepatitis B(CHB) is a serious consequence of post hepatitis B virus infection, although the chronic rate is inverse with age but might be linked to a significant percentage of deaths associated to cirrhosis and liver cancer. HBV serology and measurement of hepatocytic enzymes with the viral load can expect disease prognosis and response to medications. HBV Genotyping is vital for extra epidemiological studies. During HBV persistent infection, the absence of a proofreading role leads to a higher rate of mutation. The most common mutations are in the basal core promoter (BCP) and precore (PC) regions, which reduce and abolish HBeAg, respectively. HBeAg states to an active viral replicative event and pointed to more infectivity to others. As a result, the virus may be able to evade the immune system, enhancing the persistence of HBV infection. The current study aimed to determine the correlation of hepatitis B viral core mutations in relation to genotypes in different stages of chronic Hepatitis B virus infections and to determine the impact of HBeAg status in chronically infected patients on various baseline tests. A cross sectional study including 90 patients (48 males and 42 females) who were recruited from GIT and Liver Diseases Teaching Hospital, Baghdad, Iraq. The study was carried out at the department of Microbiology, College of Medicine, University of Baghdad during the period between January 2020 and March 2020. Five - ten ml of blood sample was collected and then plasma was obtained and stored at -20°C/- 80°C till used. Studied group had positive HBsAg for more than six months and were not on antiviral treatments. Other routine investigations were done for each participant such as LFT, serological tests for HBV markers. HBV viral load and genotypes detection using Real time- PCR, finally isolates of core gene that were sent for sequencing. In this study, HBeAg was negative in 81/90 (90%) patients and positive in 9/90 (10%). There was significant association between HBeAg serostatus and HBV- DNA viral load (p=0.042), as more than half of the cases (55.6%) had high levels of HBV serum DNA (≥2000 IU/ml) and positive HBeAg compared to 24.7% of cases with negative HBeAg. No statistically significant differences were observed regarding HBeAg status with demographic and other baseline characteristics. In the present study, Genotype D was the most predominant in 64 out of 90 (71.1%) of samples while mixed D and A (2.2%). There was highly significant association between HBV genotypes and HBV DNA load(p=0.001) but not with other studied characteristics The percentage of HBeAg negativity in genotype D patients was higher in comparison to positive HBeAg. HBV genotype D is associated with elevated ALT and AST (20.3% and 23.4%) respectively. Of 66 HBsAg positive cases with detected HBV-DNA viral load there were only 35 samples positive for PCR amplification of HBV core gene with strong positive bands that were sent for sequencing. All nucleotide sequences reported in this article have been discovered for core gene partial sequencing specifically for D genotype were further aligned and only ten sequences showed 97-100% similarity and 4 newly registered sequences that were deposited in the National Center for Biotechnology Information GenBank database with definition numbers of (Ay149881,Ay149882, Ay149883, Ay149884) and accession numbers of (LC610896, LC610897, LC610898, LC610899) respectively. In this study one isolate from a newly registered sequences ( Ay149883,sr=LC610898) of precore mutation was identified out of 35 isolates (2.86%). Nucleotide mutations in genotype D, including precore stopcodon variant for HBeAg were G1839A, A1901G, C1980A, T2015A and T2094A. Phylogenetic tree of HBV precore/core -gene partial sequence constructed using 4 isolates from this study along with 19 Genbank reference sequences. In conclusion, our findings suggest that most of studied CHB patients are HBeAg negative with the predominance of D genotype suggesting long term monitoring for disease progression are needed .Five unique mutations in the precoe region were identified in one sample with HBeAg negative, co-infected with HDV ,associated with high viral load and elevated liver enzymes, indicating the existence of precore stop codon variant aided in the absence of HBeAg and the disease was in the reactive phase. Further studies with larger sample size are necessary to explain the impact of these mutations on clinical outcomes and response to treatment.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب