تأثير مستخلصات نباتين طبيين (Thuja orientalis و Quercus infectoria) في التعبير الجيني لجين papE لبكتريا Escherichia coli الممرضة للمسالك البولية

الباحث

عمار جواد كاظم

المشرف

حسن مجيد رشيد

الجامعة

جامعة بغداد

الكلية / القسم

العلوم / علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2021

لغة الرسالة

انكليزي

الكلمات المفتاحية

Uropathogenic Escherichia coli;papE gene;Thuja orientalis;Quercus infectoria

من أجل دراسة تأثير بعض المستخلصات النباتية على التعبير الجيني لجين pap E للإشريكية القولونية المسببة للأمراض, تم جمع 112 عينة بول من مستشفيات بغداد وفحصت بتقنيات تعريف مختلفة. تم تشخيص 70 عزلة )762.5( على أنها الإشريكية القولونية بعد التشخيص المجهري والزرعي. تم إجراء اختبار النظام المضغوط 2 VITEK على هذه العزلات لتأكيد النتائج. أظهرت نتيجة الفصل الكهربي لتفاعل السلسلة المتعدد على العزلات أن ثلاثة عشر عزلة (718.6) تحتوي على جين pap E وهي الإشريكية القولونية المسببة لالتهابات المسالك البولية، تسع عزلات من النساء )469.23( وأربع عزلات من الرجال (430.77). تم إجراء اختبار الحساسية للمضادات الحيوية ، وتم خلط أربع سلالات عالية المقاومة مع المستخلص المائي الحار ومستخلص الايثانول لنبات الجفت ونبات العفص والمستخلص المختلط لكلا النباتين (1:1) في صفيحة تحتوي 96 حفرة ELISA وحضنت لفترات مختلفة. بعد نصف و 6 و 12 ساعة في الحضانة ، تم تحديد تأثير مستخلص النباتات على نمو البكتيريا بواسطة قارئ ELISA يعتبر التركيز المخزون هو التركيز الوحيد الذي يؤثر على نمو العزلات بينما لم تظهر التركيزات الأخرى تأثيراً واضحاً على نمو العزلات. تبين أن مستخلص الايثانول للنباتات المختلطة كان له تأثير أكبر على سلالة 110 من المستخلص المائي الحار. لكن المستخلص المائي الحار لكل نبات بمفرده أظهر تأثيرًا أكبر من مستخلص الايثانول. تسبب الحضانة بالمستخلص المائي الحار لنبات العفص في انخفاض معنوي لنمو العزلة من 2.124 بعد نصف إلى 1.943 و 1.811 في 6 ساعات و 12 ساعة من الحضانة على التوالي ¢ بينما تسبب مستخلص نبات الجفت في انخفاض معنوي للنمو من 2.898 بعد نصف ساعة إلى 2.266 و 2.256 بعد 6 ساعات و 12 ساعة من الحضانة مع مستخلص الايثانول على التوالي. أخيرًا ، انخفض النمو انخفاضا معنويا من 2.899 بعد نصف ساعة إلى 2.896 و 2.765 بعد 6 ساعات و 12 ساعة من الحضانة بالمستخلص المائي الحار للنباتات المختلطة على التوالي. تم فحص تأثير مستخلص النباتات على التعبير عن جين pap E بواسطة تفاعل السلسلة المتعدد في الوقت الحقيقي. واظهرت ان التأثير الاعلى للمستخلصات كان على التعبير الجيني لسلالة E10 تغيرت قيمة دورة العتبة ل 16sRNA لسلالة E10 من 21.7 قبل dalled! بمستخلص نباتات مختلطة إلى 27.9 بعد نصف ساعة من الحضانة بمستخلص الايثانول وأظهر انخفاض إجمالي في التنظيم بعد 6 و 12 ساعة من الحضانة مع المستخلص ، والى 24 و 27.5 بعد نصف ساعة و 6 ساعات من الحضانة مع المستخلص المائي الحار ، وأظهر انخفاض التنظيم الكلي بعد 12 ساعة من الحضانة مع المستخلص. بينما تم تغيير نسبة الطية لجين pap E من 1 قبل المعاملة بمستخلص النباتات المختلطة إلى انخفاض إجمالي للتنظيم بعد نصف و 6 و 12 ساعة من الحضانة مع مستخلص الايثانول ، وإلى 5 و 0.002 بعد نصف و 6 ساعات من الحضانة مع المستخلص المائي الحارء ويظهر انخفاض التنظيم الكلي بعد 12 ساعة من الحضانة مع المستخلص. من النتيجة ، يمكن استنتاج أن المستخلص الكحولي المختلط كان له تأثير أكبر على التعبير الجيني للإشريكية القولونية المسببة لالتهابات المسالك البولية ، وبالتالي يمكن الاستفادة منه مستقبلا في الحصول على علاج بديل لتقليل أو القضاء على عدوى المسالك البولية.

In order to study the effect of some plant extracts on pap E gene expression of Uropathogenic Escherichia coli, 112 urine samples were collected from Baghdad hospitals and examined by different identification techniques. 70 isolates (62.5%) were diagnosed as Escherichia coli after microscopic and cultural identifications. The VITEK 2 compact system test was done on these isolates for confirmation of the results. The result of PCR product electrophoresis of the isolates showed that thirteen isolates (18.6%) have pap E gene which is uropathogenic E. coli, nine isolates were from women (69.23%) and four isolates were from men (30.77%). Antibiotic susceptibility test was done, and four high resistant isolates were mixed with hot aqueous and ethanolic extracts of Quercus infectoria, Thuja oriantalis plants and mixed extract (1:1) of both plants in 96 well ELISA plate and incubated for different time points (30 min. ,6hrs., and 12hrs.). After 30 min., 6hrs., and 12hr. of incubation, the effect of the plants extracts on the bacterial growth was determined by ELISA reader at wavelength of 600nm. The stock (105) is the only concentration that affects the growth of the isolates, while the other concentrations did not show an obvious effect on the growth of the isolates. It was shown that ethanolic extract of mixed plants had more effect on E10 isolate than that of hot aqueous extract. But the hot aqueous extract of each plant alone showed more effect than that of ethanolic extract. The incubation with hot aqueous extract of Thuja oriantalis causes a significant decrease (P ≤ 0.05) of the isolate growth from 2.124 (O.D\nm) at 30 min. to 1.943 (O.D\nm) and 1.811 (O.D\nm) at 6hrs. and 12hrs. of incubation respectively, while that of Quercus infectoria cause a significant drop (P ≤ 0.05) of the growth from 2.898 (O.D\nm) at 30 min. to 2.266 (O.D\nm) and 2.256 (O.D\nm) after 6hrs. and 12hrs. of incubation with ethanolic extract respectively. Finally, the growth was significantly decreased (P ≤ 0.05) from 2.899 (O.D\nm) at 30 min. to 2.896 (O.D\nm) and 2.765 (O.D\nm) after 6hrs. and 12hrs. of incubation with hot aqueous extract of mixed plants respectively. The effect of the plants extracts on the expression of the pap E gene was examined by real-time PCR. It showed that the higher effect of the extracts was on gene expression of E10 isolate. The cycle threshold (Ct) value for 16sRNA of E10 isolate was changed from 21.7 cycle before treatment with mixed plants extract to 27.9 cycle after 30 min. of incubation with ethanolic extract and it showed total downregulation after 6 and 12 hrs. of incubation with the extract, and to 24 cycle, 27.5 cycle after 30 min. and 6 hrs. of incubation with hot aqueous extract, and it showed total down-regulation after 12hrs. of incubation with the extract. While the fold ratio for the pap E gene was changed from 1 before the treatment with the mixed plants extract to total downregulation after 30 min., 6hrs., and 12hrs. of incubation with ethanolic extract, and to 0.015 and 0.002 after 30 min. and 6 hrs. of incubation with hot aqueous extract, and it showed total down-regulation after 12hrs. of incubation with the extract. From the results, it can be concluded that the mixed ethanolic extract had more effect on gene expression of uropathogenic E. coli and thus can be used as a source of alternative therapy for diminishing or eradicating the urinary tract infection.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب