الكشف عن تعدد أشكال النيوكليوتيدات المفردة في مواقع محددة لجينات MMP-2 و MMP-9 لدى مرضى سرطان الرئة في محافظة النجف

الباحث

عمار عادل رشيد

المشرف

أ.د. رند محمد عبد الحسين الحسيني

الجامعة

جامعة الكوفة

الكلية / القسم

العلوم / علوم الحياة / علم الحيوان

الشهادة

ماجستير

السنة

2022

لغة الرسالة

انكليزي

الكلمات المفتاحية

Single Nucleotide Polymorphisms;MMP-2;MMP-9;Lung Cancer

يعد سرطان الرئة من بين السرطانات الأكثر شيوعًا وهو السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان في جميع أنحاء العالم، تحرت هذه الدراسة عن الدور المحتمل لتعدد أشكال النوكليوتيد المفردة (SNPs) لجين الانزيم الحال للمادة الخلالية 2 (MMP2) و جين الانزيم الحال للمادة الخلالية 9 (MMP) في مرضى سرطان الرئة. أجريت هذه الدراسة في مركز الفرات الأوسط للسرطان بمحافظة النجف الأشرف ومختبر البيولوجي الجزيئي في قسم علوم الحياة / كلية العلوم - جامعة الكوفة. وشملت الدراسة 5 مريضا عراقيا مصابا بسرطان الرئة المؤكد و25 شخصا من الأصحاء. أظهرت الدراسة إن عدد المرضى الرجال (62.66”) أعلى منه في النساء )737.33( ارتفع معدل الإصابة بسرطان الرئة معنوياً (0.05 (p< في الفئة العمرية 74-60 سنة مقارنة مع الفئات العمرية الأخرى. اعتمادًا على الموقع الذي نشأ منه الورم، كان نوع الورم الأكثر تكرارًا هو سرطان الخلايا الحرشفية )46.66%( تم تصنيف سرطان الرئة حسب درجة تمايز الخلايا الى 5.33 / مع الصنف الأول، الصنف الثاني 57.33 /، في حين إن الصنف الثالث كان 237.33. أظهر تقييم مراحل السرطان ls لحجم الورم وموقعه ونقائل العقد أن هناك 74 و 718.66 و 3 .و 7156 مع المرحلة الأولى والمرحلة الثانية والمرحلة الثالثة والمرحلة الرابعة على التوالي. في Gus أظهرت النتائج ان 51 )768( من الحالات مشتملة على نقالات العقد الليمفاوية. تم تطبيق تقنية سلسلة تفاعل البلمرة- تعدد اشكال طول الجزء المقطوع ( RFLP- (PCR للكشف عن تعدد الأشكال في جين MMP2 -1306 C/T ، وتعدد الأشكال 1562- C/T في جين MMPS في مرضى سرطانن الرئة ومجموعة السيطرة. أظهرت نتائج توزيع النمط الجيني C/T 1306- لجين MMP2 اختلافات معنوية م) (0.05>بين عناصر التحكم ،O=CT + /100 ، 25=CC) 400.00 ؛ 0-11 ، 40.00( ومرضى سرطان الرئة CC) عدد =43، $457.34 TT $724 ، 18= we CT عدد =14( 6) أظهرت الدراسة الحالية زيادة في النمط الجين MMP2 - AT dais ، TT ،CT C/T 1306 في مرضى سرطان الرئة مقارنة بالمجموعة الضابطة. كانت نتائج تحليل الارتباط بين توزيع النمط الجيني C/T 1306- للجين MMP2 مع المعابير المرضية السريرية للحالات مثل التصنيف النسيجي، ومرحلة حجم الورم ونقائل العقد ،(TNM) لم تظهر أي ارتباط معنوي (0.05 (P> بالإضافة إلى تحليل العلاقة بين توزيع النمط الجيني لجين MMP2 -1306 ©' / T SNP وحالة التدخين بين المرضى لم تكن معنوية (0.05 <م). أظهرت نتائج توزيع النمط الجيني SNP 1 / © 1562- لجين 111129 عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية (0.05 (p> بين عناصر التحكم (00):عدد-15 ، 760 ؛ '[0):عدد-9 ، 7/36 ؛ '1"1:عدد-] ، 74( ومرضى سرطان الرئة 44=axe:CC) $7586 30=2¢:CT :40/؛ '1"1:عدد-] ،1.34/). كانت نتائج تحليل الارتباط بين توزيع النمط الجيني للجين C/T SNP 1562- للجين 99 مع المعايير المرضية السريرية للحالات مثل التصنيف النسيجيء ومرحلة حجم الورم ونقائل العقد ،(TNM) لم تكن معنوية )0.05 <2 ).بينما كان تحليل الارتباط بين توزيع النمط الجيني لجين '1' / © 1562- MMP9 وحالة التدخين بين المرضى ذا دلالة إحصائية 7 (0.05>). تم ast نتائج سلسلة تفاعل البلمرة (PCR) من خلال alas تسلسل الحمض النووي. cats نتائج تحليل تسلسل الحمض النووي لجزء PCR والذي يضم موضع التغاير 1306- C/T في جين MMP2 أن جميع العينات المختارة التي تم اكتشافها سابقًا كنمط وراثي متغاير وكنمط وراثي متمائل الزيجة الطافر بواسطة تقنية RFLP-PCR تمتلك تغاير وراثي (SNP) في منطقة البادئ لجين MMP-2 (القاعدة C إلى '1) (في الموقع 3726( بالمقارنة مع تسلسل جين MMP-2 البشري (Homo sapiens) (المعرف: (NG_008989.1 المنشور في قاعدة بيانات الجينات في المركز الوطني لمعلومات التقنيات الأحيائية GenBank NCBI) ( التي اتخذت كمرجع. كشفت نتائج تحليل تسلسل الحمض النووي لجزء PCR والذي يضم موضع التغاير - C/T SNP 1562 في جين 147159 أن العينات ذات النمط الوراثي متغاير الزيجة والنمط الوراثي متماثل الزيجة الطافر والتي تم تنميطها باستخدام تقنية RFLP-PCR لها تغاير جيني (SNP) في جين MMPS (القاعدة C إلى '1) في منطقة الباديء (في الموقع 3430( مقارنة مع تسلسل الجين البشري (Homo sapiens) TNF-a (المعرف: (NG_011468.1 المنشور في قاعدة بيانات الجينات في المركز الوطني لمعلومات التقنيات الإحيائية (GenBank NCBI) التي اتخذت كمرجع. سلطت هذه النتائج الضوء على المشاركة المحتملة لكلا تعدد أشكال النوكليوتيد المفردة SNPs في جيني 147/152 MMP9 في تطور سرطان الرئة وغزو الأنسجة وتكوين النقالات الخبيثة في المرضى العراقيين.

Lung cancer is among the most frequently occurring cancers and the leading cause of cancer-related deaths worldwide. This study investigated the potential role of single nucleotide polymorphisms (SNPs) within matrix metalloproteinase2 (MMP2) and matrix metalloproteinase9 (MMP9) genes in lung cancer patients. This study was carried out in the Middle Euphrates Cancer Center in Al-Najaf governorate and Laboratory of Molecular Biology in the Department of Biology/ Faculty of Science – University of Kufa. The study population was included 75 Iraqi patients with confirmed lung cancer and 25 healthy control subjects. The frequency of distribution of patients according to gender showed that the lung cancer incidence increased significantly (p<0.05) in men (62.66%) over women (37.33%). The estimated incidence of lung cancer significant increase in the age group 60- 74 years (p˂ 0.05) in comparison with other age groups. Depending on the site from which the tumor originated, the type of tumor with the highest frequency of occurrence was Squamous cell carcinoma (46.66 %). Based on grading criteria, the presented lung carcinomas were graded into 5.33% with grade I, 57.33% with grade II, and 37.33% with grade III. Assessment of the staging of the 75 cases of lung carcinomas according to the tumor, node, and metastasis (TNM) staging system revealed that they were 4%,18.66%, 21.33% and 56% with stage I, stage II, stage III and stage IV, respectively. The frequency of lymph node metastases in the lung cancer cases revealed that just 51 (68%) cases had metastatic lymph node involvement. Restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction (RFLP-PCR) technique was performed for detection of two polymorphisms: -1306 C/T polymorphism in MMP2 gene, and -1562C/T polymorphism in MMP9 gene in lung cancer patients and control. The genotype distribution results of the -1306 C/T SNP of MMP2 gene have shown significant differences (p<0.05) between controls (CC: n= 25, 100%; CT: n=00, 00.00%; TT: n=0, 0.00%) and Lung cancer patients (CC: n= 43, 57.34%; CT: n=18, 24%; TT: n=14, 18.66%). The current study showed an increase in CT, TT genotype, and T allele of MMP2 -1306 C/T in lung cancer patients over control. The results of the association analysis between genotype distribution of the -1306 C/T SNP of MMP2 gene and clinicopathological criteria of cases such as histological grading, TNM staging and lymph node metastasis, had shown no significant association (p>0.05). Also, the analysis of the association between genotype distribution of the -1306 C/T SNP of MMP2 gene and smoking status among patients were not significant (p>0.05). The genotype distribution results of the -1562C/T SNP of MMP9 gene have shown no significant differences (p>0.05) between controls (CC: n= 15, 60%; CT: n=9, 36%; TT: n=1, 4%) and lung cancer patients (CC: n= 44, 58.66%; CT: n=30, 40%; TT: n=1, 1.34%). The results of the association analysis between genotype distribution of the -1562 C/T SNP of MMP9 gene and clinicopathological criteria of cases such as histological grading, TNM staging and lymph node metastasis, were not significant (p>0.05). While analysis of association between genotype distribution of the -1562 C/T SNP of MMP9 gene and smoking status among patients was statistically significant (p<0.05). The PCR results were confirmed by the DNA sequencing analysis. The results of DNA sequence analysis of PCR fragment including the position of -1306 C/T SNP in the MMP2 gene revealed that the samples with heterozygous genotype and mutant homozygous genotype which genotyped by RFLP-PCR technique had genetic variant (SNP) in the promoter region of MMP2 gene (base C to T) (in the 3726 location) comparing with the sequence of the human (Homo sapiens) MMP2 gene (ID: NG_008989.1) published in GenBank of National Center for Biotechnology information (NCBI) database taken as a reference. The DNA sequence analysis results of PCR fragment including the position of -1562 C/T SNP in the MMP9 gene revealed that all the selected samples which previously detected as heterozygous genotype and as mutant homozygous genotype by RFLP-PCR technique had genetic variant (SNP) in the promoter region of MMP9 gene (base C to T) (in the 3430 location) comparing with the sequence of the human (Homo sapiens) MMP9 (ID: NG_011468.1) published in Gen Bank NCBI database taken as a reference. These results highlighted on the possible involvement of both SNPs in MMP2 and MMP9 genes in the lung cancer progression, invasion, and metastasis formation in Iraqi patients.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب