دراسة مظهرية ووراثية في بكتريا Enterobacter cloacae المعزولة من مصادر سريرية مختلفة

الباحث

سجى ضياء الدين مصطفى الرضواني

المشرف

هيام عادل ابراهيم الطائي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية التربية للعلوم الصرفة / قسم علوم الحياة

الشهادة

دكتوراه

السنة

2022

لغة الرسالة

انكليزي

الكلمات المفتاحية

Enterobacter cloacae ; Phenotypic study ; Genetic study ; Clinical isolates

تضمنت الدراسة عزل وتشخيص Enterobacter cloacae UPS من المرضى الذين يعانون من حالات التهاب المجاري البولية ،Urinary tract infection (UTI) تفرحات القدم السكري ، التهابات الجروح والحروق أفات جلدية من المراجعين لمستشفيات الخنساء والسلام التعليميين في مدينة الموصل ومن كلا الجنسين ويأعمار مختلفة تراوحت بين 65-12 سنة للفترة من أيلول 2020 ولغاية كانون الثاني 2021 وتضمنت الدراسة محورين : المحور الأول: جمعت 100 عينة من الحالات أعلاه وأجريت لها اختبارات تشخيصية تضمنت الصفات الزرعية والمجهرية للمستعمرات النامية على الأوساط الزرعية المستخدمة في الدراسة واعطت جمبع العينات نموا إيجابيا وبينت نتائج التشخيص ان 25 عزلة تعود الى Enterobacter cloacae و ذ4 عزلة الى Escherichia coli و 11 عزلة الى Proteus spp. 12.5 عزلة الى Pseudomonas spp. و 7 عزلات 2 الى Staphyllococus spp. . توزعت عزلات بكتريا Enterobacter cloacae على الحالات السريرية وكالاتي: 9 عزلة من عينات الادرار و3 عزلات من تقيحات القدم السكري ، وعزلة واحدة من مسحات ،By pall وعزلة واحدة من التقرحات الجلدية . تم اختيار عزلتان من Enterobacter cloacae المعزولة من الادرار واجري لهما التشخيص الكيموحيوي باستعمال جهاز VITEK2 system واظهرت النتائج عائدية العزلات الى بكتريا Enterobacter cloacae وبنسبة تشخيص 97-95 % ويحسب نوع العزلتان . تم التحري المظهري عن قدرة العزلتان على تكوين الغشاء الحيوي بطريقة اكار احمر الكونغو اذ لوحظت قابلية العزلتان على انتاج الغشاء الحيوي من خلال تكوين مستعمرات سوداءلماعة . المحور الثاني: تضمنت الدراسة التشخيص الجزيئي للعزلتان وذلك باجراء اختبار التفاعل التضاعفي لسلسلة DNAG) باستخدام البادئ المصصمم للجين 718314 165 اذ ان هذا الجين يؤكد تشخيص هذه البكتريا التي تعود اليه ويعد ترحيل نواتج تفاعل PCR على هلام الأكاروز بتركيز 91.5 وفحصه بالأشعة فوق البنفسجية ظهرت حزم بحجم جزيئي (1250) زوج قاعدي للعزلتين كلا على حدى مما يعني وجود الجين الحامل للشفرة الوراثية الخاصة لصفة تشخيص هذه البكتريا .تم تحليل التسلسل التتابعي لجين rRNA 165في العزلتان وبينت النتائج احتواء الجين على تغايرات (طفرات) في بعض القواعد مقارنة بالموجود في موقع ال NCBI وكانت من النوع الانتقالي 112151102 والتحويلي le, Transversion هذا الأساس تم تحديد \ العلاقات التطورية والتقاربات الوراثية بين العزلتين قيد الدراسة وبين العزلات المسجلة في NCBI-gene bank لنفس النوع حول العالم وبنسب تطابق 99-98 % بعد الكشف عن الشجرة الوراثية التي توضح تسلسل القواعد النيتروجينية للعزلات المذكورة Lisle وعليه تم تسجيل العزلتين Gin tS المذكورتين في NCBI-gene bank كعزلات خاصة بالعراق وباسم .SaHy -IQ-1 ,SaHy -1)0-2 Enterobacter cloacae تم اجراء الكشف الجزيثي للجينين aS CsgdA-CsgD من الاويرينين المعروفين بجين الالتصاق الهدبي Curli Fimbriae gene والمسؤول عن تشفير انتاج الغشاء الحيوي وقد بينت نتائج تفاعل ال PCR وجود كلا الجينين ضمن جينوم كلا العزلتين إقرار المشرف نشهد أن إعداد هذه الأطروحة لطالبة الدكتوراه (أسجى ضياء الدين مصطفى) قد جرى شهادة الدكتوراه في اختصاص علوم الحياة التوقيع: الاسم: اد هيام عادل ابراهيم الطائي التاريخ: / /2022 إقرار المقوم اللغوي أشهد أن هذه الأطروحة الموسومة ب " دراسة مظهرية ووراثية في بكتريا Enterobacter cloacae المعزولة من مصادر سربرية مختلفة " قد قمت بمراجعتها وتصحيح ما ورد فيها من أخطاء لغوية وتعبيرية ويهذا أصبحت الأطروحة مؤهلة للمناقشة بقدر تعلق الأمر بسلامة الأسلوب وصحة التعبير. التوقيع: الاسم: عمار احد محمود التاريخ: / /2022 توصية رئيس لجنة الدراسات العليا ely على إقرار المشرف والمقوم اللغوي والعلمي أرشح هذه dag LY! للمناقشة. التوقيع: الاسم: أ.د. ممد سعيد فيصل التاريخ: / /2022 توصية رئيس القسم بناء على التوصيات التي تقدم بها المشرف والمقوم اللغوي والعلمي ورئيس لجنة الدراسات العلياء أرشح هذه الأطروحة للمناقشة. التوقيع: التاريخ: / /2022 قرار لجنة المناقشة تشهد بأننا أعضاء لجنة التقويم والمناقشة قد اطلعنا على هذه الأطروحة وناقشنا الطالبة سجى ضياء الدين مصطفى في محتوياتها وفيما له علاقة بها بتاريخ /| /2022 وأنَّها جديرة لنيل شهادة الدكتوراه فلسفة في اختصاص علوم الحياة عضو اللجنة عضو اللجنة oe) استاذ استاذ [Fras sill /2022 التاريخ:ء / 0 /2022 عضو dial عضو dial! استاذ مساعد استاذ مساعد [Fras sill /2022 التاريخ:ء / 2022/0 عضو dist المناقشة (المشرف) رئيس List المناقشة د. هيام Jule ابراهيم الطائني ستاذ أستاذ التاربيخ: / /2022 [Fras ill /2022 قرار مجلس الكلية اجتمع مجلس كلية التربية للعلوم الصرفة بجلسته المنعقدة في / /2022م وقرر التوصية بمنحها شهادة الدكتوراه فلسفة في علوم الحياة. مقرر مجلس الكلية عميد كلية العلوم | /2022 | /2022 جامعة الموصل (a) كلية التربية للعلوم الصرفة SEES Nye, = Oy دراسة مظهرية ووراثية في بكتربا Enterobacter cloacae المعزولة من مصادر سربربة مختلفة سجى ضياء الدين مصطفى الرضواني أطروحة دكتوراه علوم الحياة Cal pail الاستاذ الدكتورة هيام عادل الطائي 4ه م

A The study included isolating and diagnosing Enterobacter cloacae bacteria, from patients they suffer from UTI urinary tract infection ,diabetic foot ulcers ,wound, burns infection and skin lesions in Al- khansaa and Al-sallam teaching hospitals in the city of Mosul,0f both sexes, with different ages ,ranging from 12-65 years, for period from September 2020 to January 2021. The study include two axes : First axis: Hundred bacterial samples were collected from the above cases and diagnostic of the colonies growing on the culture media used in the study .The samples showed positive growth and diagnostic results appeared the 25 isolates belonged to Enterobacter cloacae ,45 isolates of Escherichia coli,11 isolates of Pseudomonas spp. And 7 isolates to Staphylococcus spp. . Enterobacter cloacae isolates were distributed among clinical cases as follows : 19 isolates from urinary tract infection samples ,3isolates from diabetic foot ulcer and 1 isolate from burn smears,1 isolate from skin ulcer. Two isolates of Enterobacter cloacae isolated from the urine were selected and conducted . They had a biochemical diagnosis using the VITEK2 System, and the results showed the isolates belonged to Enterobacter cloacae , with a diagnosis rate of 95-97% as a type of isolation .The ability of the two isolates to form a biofilm was investigated phenotypically by Congo red agar method ,as the ability of the two isolates to produce a biofilm was observed through the formation of shiny black colonies . Second axis: The study included the molecular diagnosis of the two isolates by conducting attest of PCR Poly Chain Reaction test using the primer designed for the 16s rRNA gene ,since this time the diagnosis of this bacterium belongs to it, and after transferring the product of the PCR B separator on an agarose gel with a concentration of 1.5 % and sensing it with ultraviolet rays ,bands appeared two parts (1250) base pair size for the two isolates separately , which means the presence of the gene carring the special genetic code for a diagnostic trait this bacteria ,then ,the sequence analysis of the 16s rRNA gene in the two isolates showed that the gene contained variations (mutations) is some bases compared to what was found in the NCBI site , and it was of the transitional and transitional type.One this basis , the evolutionary relationships and genetic coexistences between the two isolates understudy were identified. Among the isolates registered in the NCBI – gene bank for the same type around the world ,match ratio of 98-99% is attributed After the discovery of the genetic tree that explained the sequence of the nitrogenous bases of the previously mentioned isolates ,therefor , the two bacterial isolates in the NCBI-gene bank were registered as a special strains for Iraq in the name of SaHy-IQ-1, SaHy-IQ-2 Enterobacter cloacae . Two CsgA-CsgD genes was carried out as part of the two operons known as the ciliary adhesion gene (Curli Fimbriae gene), which is responsible for encoding biofilm production .The results of the PCR reaction showed the presence of both genes with in the genome of both isolates.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب