التشخيص الجزيئي لعدد من Paenibacillus spp. والتحري عن تأثيرها في السيطرة على الإصابات البكتيرية الجلدية في الجرذان المختبرية

الباحث

رنا خالد احمد غايب الطريا

المشرف

اديبة يونس شريف النعمان - نجوى ابراهيم خليل البرهاوي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية التربية للعلوم الصرفة / قسم علوم الحياة

الشهادة

دكتوراه

السنة

2022

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

Paenibacillus ; التشخيص الجزيئي ; الإصابات الجلدية ; الجرذان المختبرية

تهدف الدراسة الحالية إلى عزل وتشخيص بكتريا Paenibacillus sPP. من أنواع مختلفة من اللبن الرائب المحلي بمدينة الموصل ¢ جمعت 80 عينة لبن وبواقع 20 عينة لكل نوع من اللبن والتي شملت لبن الاغنام ، الابقار ، الجاموس ٠ الماعز ، وتم الحصول منها على 10 عزلات لبكتريا Paenibacillus sPP. وبنسبة %12.5 من المجموع AS للعينات قيد الدراسة ، توزعت العزلات البكتيرية بواقع 5 عزلات من لبن الاغنام و 2 عزلتين من لبن الابقار و3 عزلات من لبن الجاموس وبنسب مئوية بلغت 96050 ، %20 ٠ %30 على التوالي ، الا أنه لم يتم الحصول على اية عزلة من لبن الماعز. شخصت العزلات البكتيرية بالاعتماد على الفحوصات الشكلية والاختبارات الكيموحيوية، وتم تأكيد تشخيصها بتقنية تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) وباستخدام الجين rRNA 165 ، تم تحديد نوع وسلالة العزلات بإرسالها الى مركزن MBC ، تم التعرف على تسلسل القواعد النيتروجينية للجين 16S rRNA الخاصة ببكتريا Paenibacillus sPP. ، وبعد مقارنتها مع نظائرها المصّنفة عالمياً على موقع NCBI تم تشخيص )3( انواع مختلفة من جنس LS) Paenibacillus sPP. ، نوعان منها كانت مشخصة ومسجلة في بنك الجينات باسم Paenibacillus lautus و Paenibacillus ginsengagri © اما النوع الثالث فقد تم تشخيصه وتسجيله عزلة محلية جديدة في بنك الجينات ضمن الدراسة الحالية تحت اسم -Paenibacillus sp.RAN كما تم التأكد من تشخيص بعض انواع البكتريا المرضية المعزولة من الاصابات الجلدية للإنسان والتي تم الحصول عليها من المختبرات البحثية لقسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة بجامعة الموصل والتي Kocuria 171511706 , ded Staphylococcus haemolyticus , Staphylococcus aureus , Klebsiella pneumonia , Escherichia coli , pseudomonas aeruginosa للتأكد من نقاوتها وحيويتها ، LS أخثبرت حساسيتها ل )7( انواع من المضادات الحيوية ، وقد اظهرت استجابات متباينة لهذه المضادات الحيوية ، وبنسب مقاومة مختلفة تراوحت بين )%14 - %100( لكل من المضاد الحيوي Ciprofloxacin و Bacitracin على sll فيما اظهرت حساسية بنسبة تراوحت بين )%75 - %100( لكل من المضاد الحيوي Spiramycin و Amikacin على التوالي. تم فصل الراشح البكتيري من الانواع الثلاثة لبكتريا Paenibacillus sPP. وقد اظهرت النتائج تأثيرات عالية وبجميع التراكيز تقريباً وكان ذلك واضحاً من خلال اقطار مناطق التثبيط | التي تم قياسها وتدوينها ، اظهرت البكتريا P.aeruginosa استجابة عالية وبقطر تثبيطي )25( ملم لراشح بكتريا Paenibacillus ginsengagri عند التركيز )200( ملغم | aa 9 ، تلتها البكتريا S-haemolyticus اظهرت اعلى استجابة وبقطر تثبيطي )24.3( ملم لراشح بكتريا Paenibacillus 5 عند التركيز )100( ملغم / Pau كما كان لاستجابات Nall البكتيرية المرضية تجاه الرواشح البكتيرية فروقاً معنوية واضحة عند مستوى احتمالية (p > 0.01) . ل] ستخدم الراشح البكتيري لبكتريا acl gil, Paenibacillus sPP. الثلاثة وبتراكيزه المختلفة لدراسة تأثيره لإنتاج الغشاء الحيوي Biofilm من قبل البكتريا المرضية قيد الدراسة ، وقد كان للرواشح الثلاثة تأثيرات متباينة في تثبيط قابلية البكتريا المرضية على تكوين الغشاء اظهر راشح بكنيريا ost Paenibacillus ginsengagri جيدة في معالجة الجروح المصابة تجريبياً بنوعي البكتريا P.aeruginosa و S.aureus داخل الجسم الحي In vivo الجرذان المعالجة بالمضاد الحيوي aby ، Amikacin بدلالة انخفاض اعداد المستعمرات البكتيرية النامية على وسط الاكار المغذيء كما بينت النتائج أن للراشح البكتيري للنوع Paenibacillus ginsengagri تأثيراً واضحاً في تحفيز الاستجابة المناعية في الجرذان التجريبية وذلك من خلال الزيادة الحاصلة في نسب التعداد الكلي والتفاضلي لخلايا الدم البيضاء. كما أظهرت النتائج وجود فروق معنوية واضحة في تحفيز الاستجابة المناعية المتمثلة بزيادة معدلات معامل البلعمة بالنسبة لمجاميع الجرذان المعاملة بالراشح البكتيري مقارنة مع المجاميع غير المعاملة. تم تشخيص المركبات الداخلة في تكوين كل راشح بكتيري للأنواع ADU من WAS 15 وذلك باستخدام تقنية (GC-MS) ، أظهرت النتائج أن كلا من راشح WAS Paenibacillus lautus وراشح بكتريا Paenibacillus ginsengagri يحتوي على )28( و )24( مركباً كيميائياً على التوالي ، أما راشح بكتريا Paenibacillus sp.RAN فيحتوي على )29( مركباً كيميائيً.

A The current study has aims to isolate and diagnose Paenibacillus sPP. bacteria from different types of local yogurt in the city of Mosul. eighty Yogurt samples were collected, includes (20) samples of yogurt (sheep, cows, buffaloes and goats), 10 isolates of Paenibacillus sPP. were obtained from them. (12.5%) of the total population of the samples under study, the bacterial isolates were distributed by (5) isolates from sheep’s yogurt, two isolates from cow’s yogurt, and (3) isolates from buffalo yogurt with percentages of (50%, 20%, 30%), respectively. However, There is no isolate bacteria from goat's yogurt. Bacterial isolates were diagnosed based on morphological and biochemical tests, and their diagnosis was confirmed by (PCR) using the 16S rRNA gene of the bacteria. In order to decide on the strain type and the isolates, the bacterial isolates were sent to MBC. the sequence of nitrogenous bases of the 16S rRNA gene of Paenibacillus sPP. was identified, and after comparing it with its globally classified analogues on the NCBI website, (3) different types of Paenibacillus sPP. were diagnosed, two of which were diagnosed and registered in the genebank as Paenibacillus lautus and Paenibacillus ginsengagri, and the third type was diagnosed and registered as a new local isolate in the genebank within the current study under the name Paenibacillus sp.RAN. It was also confirmed the detection of some types of pathogenic bacteria isolated from human skin infections obtained from the research laboratories of the Department of Biology Sciences at the College of Education for Pure Sciences at the University of Mosul, which included K. kristinae, S.haemolyticus, S.aureus, K.pneumonia, E. coli, and P. aeruginosa to ensure its purity and vitality, and its sensitivity to (7) types of antibiotics was tested. They showed different responses to these antibiotics, with different resistance rates ranging between (14% - 100%) to the two antibiotics Ciprofloxacin and Bacitracin respectively. While it showed a sensitivity ranged between (75% - 100%) to the antibiotics Spiramycin and Amikacin, respectively. The bacterial filtrate was separated from the three types of Paenibacillus sPP. . P. aeruginosa showed a high response with an inhibitory diameter of (25) mm to the filter of Paenibacillus ginsengagri at the concentration (200) mg / cm3, followed by S.haemolyticus, which showed the highest response and inhibitory diameter (24.3) mm to the B filtrate of Paenibacillus lautus at concentration (100) mg / cm3. The responses of pathogenic bacterial isolates to bacterial infiltrates had clear significant differences at the probability level (p < 0.01). The bacterial filtrate was used for Paenibacillus sPP. bacteria with its three types and with different concentrations to investigate the production of Biofilm by the pathogenic bacteria under study. The three filters had different effects in inhibiting the susceptibility of pathogenic bacteria to biofilm formation with significant differences at the probability level (p < 0.01). The bacterial filtrate of Paenibacillus ginsengagri showed good effects in the treatment during (14) days of treatment. The experiment compared with the untreated infected groups of rats and the group of rats treated with the antibiotic Amikacin, in terms of the low numbers of bacterial colonies developing on the agar nutrient medium. The results also showed that the concentration (200) mg/cm3 of the bacterial filtrate had a greater effect on inhibiting the growth of P.aeruginosa bacteria, while the concentration (100) mg/cm3 of the bacterial filtrate had a greater effect on the growth of S.aureus bacteria. The results also showed that the bacterial filtrate of Paenibacillus ginsengagri had a clear effect in stimulating the immune response in experimental rats through the increase in the percentages of total and differential white blood cell counts. The results also showed clear significant differences in stimulating the immune response represented by an increase in phagocytic coefficient rates for groups of rats treated with bacterial infiltrate compared to untreated groups. The compounds included in the composition of each bacterial filtrate of the three types of Paenibacillus sPP. bacteria were diagnosed using the technique of (GC-MS). The results showed that the filtrate of Paenibacillus lautus and the filtrate of Paenibacillus ginsengagri contain (28) and (24) chemical compounds, respectively, while the filtrate of Paenibacillus sp.RAN contains (29) chemical compounds. --- page 195 [OCR+] --- University Of Mosul College Of Education For Pure Science Molecular diagnosis for some of Paenibacillus spp. And investigation on effects for skin bacterial infections control in experimental rats Rana Khalid Ahmed AL-Tareea PH.D Thesis Biology Supervised By Prof. Dr.Adeeba Younis Shareef Alnuaman Assist. Prof. Dr.Najwa Ibraheem Khaleel Albarhawi 2022 A.D. 1443 A.H. [OCR of page] University Of Mosul (a) College Of Education i) صم For Pure Science pienso Molecular diagnosis for some of Paenibacillus spp. And investigation on effects for skin bacterial infections control in experimental rats Rana Khalid Ahmed AL-Tareea PH.D Thesis Biology Supervised By Prof. Assist. Prof. Dr.Adeeba Younis Shareef Dr.Najwa Ibraheem Khaleel Alnuaman Albarhawi 2022 A.D. 1443 A.H. --- page 196 [OCR+] --- Molecular diagnosis for some of Paenibacillus spp. And investigation on effects for skin bacterial infections control in experimental rats A Thesis Submitted By Rana Khalid Ahmed AL-Tareea To The Council of College of Education for Pure Science University of Mosul In Partial Fulfillment of Requirements for The Degree of PH. D In Biology Supervised By Prof. Dr.Adeeba Younis Shareef Alnuaman Assist. Prof. Dr.Najwa Ibraheem Khaleel Albarhawi 2022 A.D. 1443 A.H. [OCR of page] Molecular diagnosis for some of Paenibacillus spp. And investigation on effects for skin bacterial infections control in experimental rats A Thesis Submitted By Rana Khalid Ahmed AL-Tareea To The Council of College of Education for Pure Science University of Mosul In Partial Fulfillment of Requirements for The Degree of PH. D In Biology Supervised By Prof. Assist. Prof. Dr.Adeeba Younis Shareef Dr.Najwa Ibraheem Khaleel Alnuaman Albarhawi 2022 A.D. 1443 A.H.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب