التوصيف الجزيئي لبكتريا Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi ودراسة التعبير الجيني للجينات المشفرة لهرمون اندول حامض الخليك IAA

الباحث

ريم علي أحمد الدباغ

المشرف

رغد نواف جرجيس الزيدي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية التربية للعلوم الصرفة / قسم علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2022

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

التوصيف الجزيئي ; أورام الزيتون ; التعبير الجيني ; اندول حامض الخليك

تضمنت الدراسة الحالية عدة محاورء المحور الأول: اختص بعزل بكتردا 5107101 0071101105 من أورام الزيتون Olea europa العائدة لمواقع مختلفة من مدينة الموصلء وشملت مناطق (الفاضلية، الرشيدية، بستنة نينوى بعشيقة؛ AS حاوي الكنيسة، حي العربي)، وشخصت العزلات اعتمادا على الصفات المظهرية والزرعية والاختبارات الكيموحيوية والأمراضية. وجاءت نتائج التشخيص الجزيئي بتضخيم الحمض النووي DNA باستعمال تقانة التفاعل التضاعفي المتعدد التداخل Multiplex Nested PCR وباستعمال بادئات متخصصة لتؤكد عائدتيها إلى جنس 5©1:0011101105/نوع ،savastanoi حيث لوحظ انفصال حزما منفردة أو مزدوجة متالقة ذات دقة واضحة عند الحجم الجزيئي )338( زوج قاعدي و(454) زوج قاعدي بالمقارنة مع als الواسمات الجزيئي في كل عزلة من العزلات العائدة لبكتريا -Pseudomonas savastanoi من خلال oly شجرة التقارب الوراثي للعزلات المشخصة مع عزلات مرجعية تابعة لنفس الجنس والنوع تبين أنها تقع ضمن نفس العنقود وبنسبة تطابق (100) 90 وفق برنامج -DNA Blast المحور الثاني: اهتم بعزل السكر المتعدد الخارجي EPS من العزلات أعلاه، وتم انتخاب سبع عزلات من 50105101101 Pseudomonas وهي ،Pss5 ،Pss4 ،Pss3 ،Pss2 ،Pss1) 6و5و2 7ه بوصفها أفضل عزلات منتجة للسكريات المتعددة الخارجية بناء على المظهر الخارجي للمستعمرات ونموها اللزج على الوسط الصلبء وأظهرت نتائج الغريلة الثانوية أن أفضل عزلة من بين العزلات السبع كانت Gus Pseudomonas savastanoi (Pss3) أعطت أفضل إنتاج للسكر المتعدد الخارجي والذي بلغ (3)غم/لتر على الوسط sey King M ثلاثة أيام من التحضين وتضمن تنقية وتوصيف السكر المتعدد الخارجي المعزول من البكترياء إذا تم الكشف عن تركيب السكر المنتج والمستخلص من البكتريا باستعمال تقنية ال HPLC ،TLC وأظهرت النتائج أن الوحدات الأساسية التي يتكون منها هذا السكر هي الكلوكوزء والفركتوزء والمانوزء وهذا ما أكدته نتائج التشخيص بتقنية ال HPLC ، كما تم التأكد من كون المركبات المستخلصة ذات طبيعة كاريوهيدراتية، وذلك بدلالة امتصاصية المادة الفعالة عند الطول الموجي 3421.72 مل والمتمثلة بمجموعة الهيدروكسيل (OH-) Hydroxyl والكاريونيل )carbonyl \/( عند الطول الموجي 173.08 مل على التعاقب وأن محتوى الرماد لل EPS المنتج كان )%3.4(، كما أظهرت نتائج التشخيص خلو السكر المنتج من النشاء وقد تناول تقييم الفعالية البايولوجية للسكر المتعدد الخارجي المنتج من العزلة المنتخبة، وأظهرت النتائج التأثير التثبيطي لد EPS على بعض عزلات LAS المسببة للأمراضء, وأظهرت النتائج فعاليته المضادة ضد البكتريا وفعاليته المضادة للأكسدة من خلال قدرته وتأثيره على كبح الجذور الحرة، وإثبات نجاحه في تكوين المستحلبات مع مختلف الزيوت النباتية والتي تعد أمرا واعدا في إمكانية استعماله في مختلف الصناعات الغذائية كصناعة الألبان والأجبان وغيرها. أما المحور الثالث: فقد تناول دراسة تأثير الأمواج فوق السمعية ذات التردد (47.6) كيلو هرتز ولمدد زمنية متابينة (90: 60، 30 15، 5) ثانية، Gus أظهرت النتائج أن أعلى معدل في عدد المستعمرات كان قد سجل عند المعاملة )60( ثانية aly )57( مستعمرة ويكثافة ضوئية Optical density وصلت )2.8(، ثم دراسة تأثير هذا العامل الفيزيائي في التعبير الجيني للجينات المشفرة لهرمون إندول حامض الخليك TAA باعتماد تقانة التضخيم الكمي (RT- GPCR) all Gus أظهرت نتائج التعبير الجيني للمورثين 2577م PSN قيد الدراسة، وجود فروقات واضحة في مستويات التعبير الجيني في عزلات المعاملة ومعاملة السيطرة، إذ بينت النتائج انخفاض التعبير الجيني (Down regulation) للموريث PSV في العينة (2554)1 عند التعرض للأمواج فوق السمعية بالجرعة )47.6/60( KHZ/Sec والتي بلغت dus التعبير الجيني فيها )1.950(، Lay سجلت أعلى تعبير (Up regulation) i= للمورث ذاته والواقع تحت نفس تأثير المعاملة في العزلة(0552)1 aby (2.211)، وكذلك كان الحال PSN Cay gall للعزلات المعرضة للتأثير ذاته الذي تم تسجيله في العزلة Pss4(T) والبالغ )2-959(، وسجل أدنى تعبير جيني في العزلة Pss3(T) ahs (1.054). كما أشارت نتائج التعبير الجيني للمورثين PSN التابعة للعزلات إلى تباين في مستوى التعبير الجيني للعزلات، إذ كان الأعلى (تنظيم مرتفع (Up regulation في العزلة 2552 وبلغ Lain ،)1.467095( كانت العزلة 2586 الأدنى تعبيرا للجين (Down regulation) بين العزلات، كما بينت النتائج ان العزلة الأعلى تعبيرا للجين PSV قد سجل في العزلة 2954 aby (2.4066) وللعزلة 2553 كانت الأدنى تعبيراً للجين بين العزلات قيد الدراسة.

A The current study included several Parameters, the first Parameter concerned with the isolation of Pseudomonas savastanoi bacteria from Olea Europa olive tumors belonging to different sites in the city of Mosul, included the areas of Al-Fadiliyah, Rashidiya, Nineveh Gardens, Bashiqa, Kubba, Hawi Church, and Al-Arabi neighborhood the isolates were diagnosed based on Phenotypic, cultivar, biochemical and pathological tests. The results of the molecular diagnosis by amplification of DNA using Multiplex Nested PCR technology and with specialized primers to confirm their return to the genus Pseudomonas savastanoi, where it was observed that single or double bundles separated with clear accuracy at the molecular size (338) base pair and (454) base pair compared to the molecular markers scale in each isolate of Pseudomonas savastanoi. By constructing the Phylogenetic tree for the diagnosed isolates with reference isolates belonging to the same genus and species, it was found that they fall within the same cluster with 100% congruence according to the DNA Blast program. The second Parameter the study was concerned with isolating the exo polysaccharide (EPS) from these isolates, seven isolates of Pseudomonas savastanoi were selected which are Pss1, Pss2, Pss3, Pss4, Pss5, Pss6, Pss7 as the best isolates producing EPS based on the external appearance of the colonies and its viscous growth on the solid medium, The results of the secondary screening showed that the best isolate among the seven isolates was Pseudomonas savastanoi (Pss3), which gave the best production of EPS, which was equivalent to 3 g / liter on King M medium, and after three days of incubation.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب