عزل وتشخيص بايوكيميائي وجزيئي لعزلات من الرايزوبيا المحلية وتقييم فعالية المستخلص الخام المضادة للأحياء المجهرية

الباحث

محمد حامد جاسم الجبوري

المشرف

رعد حساني سلطان علاوي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية التربية للعلوم الصرفة / قسم علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

بكتريا الرايزوبيا ; التشخيص الجزيئي ; العقد الجذرية ; الفعالية المضادة للأحياء المجهرية

Calas هذه الدراسة عزل 25 عزلة من بكتريا الرايزوبيا من العقد الجذرية لنباتات بقولية مختلفة مثبتة للنايتروجين والتي جُمعت من مناطق زراعيّة وبيئية مختلفة من محافظة نينوى-العراق. أظهرت نتائج الإختبارات البايوكيميائية ان جميع عزلات الرايزوبيا المدروسة لها قابلية على النمو على وسط الرايزوبيا الأدنى. كما وأظهرت النتائج قدرة جميع عزلات الرايزوبيا على استغلال السترات كمصدر وحيد للكاربون ماعدا بكتريا R. leguminosarum bv. trifolii العزلة MH3 المعزولة من العقد الجذرية لنبات البرسيم Trifolium alexandrinum L. وبكتريا Ensifer meliloti العزلتين MHS و 6 ]اوالمعزولة من العقد الجذرية لنبات الحلبة .Trigonella foenum-graecum L, كما وتباينت العزلات في قدرتها على gus الجيلاتين. وأظهرت جميع عزلات الرايزوبيا المدروسة نتيجة موجبة لإختبار ثلاثي السكر والحديد TST في حين تباينت العزلات في انتاجها لغاز كبريتد الهيدروجين FHyS أظهرت نتائج الدراسة الحالية ان جميع عزلات الرايزوبيا المدروسة موجبة لإختبار اليوريز والبروموثيمول الازرق والاندول و الكاتاليز و الاوكسيديز وسالبة لإختبار المثيل الاحمر وفوكس- بروسكاورء في حين أظهرت النتائج ان عزلات بكتريا الرايزوبيا WL في قابليتها على استغلال السكريات المختلفة المدروسة منها المانوز والسكروز والارابينوز والفركتوز والمالتوز والكلوكوز والسوربيتول والزايلوز واللاكتوز والمانيتول بدرجات متباينة. وان أفضل مصدر كاربوني للنمو كان سكر الكحولي المانيتول. ان أغلب عزلات الرايزوبيا المدروسة أظهرت قابليتها على تحمل تراكيز مختلفة من كلوريد الصوديوم NaCl ولحد تركيز %8.0، ماعدا بكتريا Ensifer fredii by. fredii العزلتين MHI و 211113 والمعزولة من العقد الجذرية لنبات اللوبيا.. 1 Vigna unguiculata وبكتريا Ensifer meliloti العزلات MH8 و 0 :71151205 المعزولة من العقد الجذرية Medicago sativa 1. al) Sli وبكتريا Rhizobium sp. العزلة MH23 المعزولة من li القطب الشائك ..آ Tribulus terrestris كانت مقاومة لحد التركيز909.0. Lad يخص الحساسية والمقاومة للمضادات الحياتية Aug ral فقد أظهرت النتائج أن جميع عزلات بكتريا الرايزوبيا المدروسة حساسة تجاه المضاد الحيوي Chloroamphenicol وبتركيز 10 مايكروغرام/ cde إذ بلغ معدل قطر التثبيط 28 ملم في العزلة Ensifer meliloti MH22 و 12ز10110<3م01) وبتركيز 10 مايكروغرام/ مل إذ بلغ أعلى معدل قطر تثبيط 42 ملم في العزلة .R. leguminosarum by. phaseoli MH16 كذلك تباينت مقاومة عزلات بكتريا الرايزوبيا المدروسة لأملاح المعادن الثقيلة المختلفة. إذ أظهرت جميع عزلات الرايزوبيا حساسية تجاه ملح كلوريد الكوبلت 00012 بتركيز 5000 مايكروغرام/ مل إذ بلغ أعلى معدل قطر تتبيط 36 ملم في بكتريا Ensifer fredii bv. fredii العزلة MH2 المعزولة من نبات اللوبيا Vigna unguiculata L. في حين أظهرد ت النتائج ان بكتريا Ensifer meliloti العزلة 2/1115 | مقاومة تجاه هذا الملح وبتركيز1000 مايكروغرام/ ce أظهرت النتائج ان جميع العزلات مقاومة لملح كلوريد النيكل 711012 ولجميع التراكيز100 و500 و1000 و5000 مايكروغرام/ مل. وأظهرت نتائج الدراسة الحالية ان جميع عزلات الرايزوبيا كانت موجبة لإختبار انتاج جزيئات سطح الخلية؛ إذ بلغ أعلى معدل انتاج للسكر المتعدد الخارجي EPS 3.76 غم/ لتر من العزلة R. leguminosarum by. viciae 5 المعزولة من العقد الجذرية لنبات الباقلاء .Viciae faba L. أظهرت dai دراسة Atal المضادة المايكروبية لراشح التخمير الخام للمزارع السائلة لعزلات بكتريا الرايزوبيا فعّالية تجاه أغلب العزلات المرضية المدروسة، إذ بلغ أعلى معدل قطر تثبيط 25 ملم عند تطبيق راشح التخمير الخام للعزلة Ensifer meliloti MH15 والمعزولة من العقد الجذرية لنبات Medicago al) sativa L. تجاه البكتريا المرضية coli MJ20 .2 وأعلى معدل قطر تثبيط بلغ 27 ملم عند تطبيق راشح مزرعة التخمير للعزلة Ensifer meliloti MH10 تجاه البكتريا المرضية Bacillus cereus 4، في حين بلغ أعلى معدل قطر تثبيط 25 عند تطبيق الراشح الخام لبكتريا Ensifer fredii bv. fredii 1 والمعزولة من نبات اللوبيا Vigna unguiculata L. تجاه البكتريا المرضية MJ22 Salmonella typhi بلغ أعلى معدل قطر تثبيط 29 ملم عند تطبيق الراشح الخام dey jad التخمير للعزلة Ensifer meliloti MH17 تجاه hill الممرض للنبات 1/1130 Aspergillus niger في حين بلغ أعلى معدل قطر تثبيط 28 ملم عند تطبيق راشح المزرعة السائلة للعزلة R. Abs jnall Leguminosarum bv. viciae MH21 من العقد الجذرية لنبات الباقلاء Viciae faba L تجاه الفطر الممرض -Fusarium 76711111101065 1/1132 Still في os بلغ (lel معدل قطر تثبيط 26 ملم عند تطبيق راشح التخمير الخام للمزرعة السائلة للعزلة Ensifer meliloti MH6 المعزولة من العقد الجذرية لنبات الحلبة Trigonella foenum—gracum L, تجاه العزلة المرضية داء المبيضات 1/1134 .Candida albicans أظهرت نتائج تحديد تطابق تسلسل القواعد النايتروجينية لنواتج تفاعل البلمرة المتسلسل للتسلسل الجزيئي للمورث 113814 165 منتخبة معزولة في هذه الدراسة مع تسلسلات العزلات القياسية المسجلة في بنك الجينات من أجل الحصول على تتابعات القواعد النايتروجينية ان العزلة الاولى Icl|Query-44061 التي GE من العقد الجذرية لنبات القطب الشائك Tribulus terrestris L. كانت قريبة بنسبة %97.27 من السلالة القياسية .م5 Rhizobium (KF984469.1) 888-3360 فيما يخص العزلة الثانية 22739- Icl|Query التي عزلت من العقد الجذرية لنبات الباقلاء faba Vicia L. فقد تطابقت بنسبة 9/097 من ADL القياسية والمسجلة في بنك Rhizobium leguminosarum strain RP1 (KY940047.1) otal)

a This study included isolation of twenty five rhizobial bacteria from root nodules of different leguminous nitrogen fixer plants which the collected from different agricultural and ecological areas from Nineveh governorate-Iraq. Biochemical test results revealed that all the isolates have the ability to grow on Rhizobial minimal medium. Also results revealed that ability of all isolates to utilize citrate as sole carbon course with exception to R. leguminosaran bv. trifolii bacteria isolate MH3 which isolated from root. nodules of Trifolium alexandrimum L. and bacteria Ensifer meliloti MH5 and MH6 isolates. which isolated from root nodules of Trigonella foenum-graecum L. Also there were variations in ability of isolates for gelatin liquefaction. All the studied isolates revealed positive result for triple sugar iron (TSI), whereas there were variation of among the isolates for production of hydrogen sulfide gas (H2S). Results of this study revealed that all the rhizobial isolates are positive for urease, bromothymol blue, indole, catalase, oxidase and negative for methyl red and Voges-Proskauer test, whereas per the results revealed that all the isolated rhizobial bacteria were variant in their ability to utilize different studied sugars like mannose, sucrose, arabinose fructose, maltose, glucose, sorbitol, xylose, lactose and mannitol with varying degrees. The best carbon, source for support growth was sugar alcohole mannitol. Most of the studied rhizobial bacteria were showed the ability of tolerance of different concentrations of sodium chloride NaCl up to 8.0% with exception with Ensifer fredii bv.fredii MH1 and MH13 isolates which isolated from bot nodules of Vigna unguiculata L. and bacteria Ensifer meliloti MH8, MH10 and MH20 isolated from root nodules of Medicago sativa L. and the bacteria Rhizobium sp. isolate MH23 isolated from Tribulus terrestris L. were tolerated. up to 9.0%. Regarding to sensitivity and resistance to studied antibiotics, results revealed that all the studied rhizobial isolates sensitivity against chloramphenicol with 10 μg/ml concentration, which inhibition zone mean value reached 28mm by the isolate Ensifer meliloti MH22 and sensitivity against Ciprofloxacin with 10 μg/ml concentration which inhibition zone mean value was a maximum with 42 mm by the isolate R. leguminosarum bv. phaseoli MH16. Also there were variation in resistance against of rhizobial isolates different heavy metal salts, which. results showed b that all rhizobial isolates sensitive against Cobalt chloride with 5000 μg/ml concentration, which a maximum inhibition zone mean value was 36 mm by the bacteria Ensifer fredii bv.fredii MH2 isolated from Vigna unguiculata L. Whereas results showed that the bacteria Ensifer meliloti isotale MH15 resistant to this salt with 1000 μg/ml concentration. Results showed that all isolates were resistance to nickel chloride salt with all concentrations. 100, 500, 1000 and 5000 μg/ml . Results of this study revealed that all rhizobial isolates were positive for production of all surface molecules, a maximum mean production of exopolysaccharide (EPS) was reached to 3.76 gm/L by the strain R. leguminosarum bv. viciae MH25 isolated from Viciae faba L. Results of antimicrobial activity revealed that the filtrate crude of fermented culture of rhizobial bacteria activity-against of most studied pathogenic strains, A maximum mean value of inhibition zone reached 25 mm. when filtrate crude of fermented culture of E. meliloti MH15 applied against pathogenic bacteria E. coli MJ20. A maximum mean inhibition zone mere 27mm when a code filtrate crude of fermented culture of Ensifer meliloti MH10 applied against Bacillus cereus MJ24. A maximum mean value of inhibition Zone was 25mm when filtrate crude of fermented culture of Ensifer fredii bv.fredii MH1 applied against Salmonella typhi MJ22, which a maximum inhibition is reached to 29 mm when filtrate crude of segmented culture of Ensifer meliloti MH17 against of pathogenic plant fungi Aspergillus niger MJ30. A maximum mean value inhibition was 28 mm when filtrate crude of fermented Culture R. leguminosarum bv. viciae MH21 applied against Fusarium verticillioides MJ32. Whereas inhibition zone here. reached 26 mm. when filtrate crude of fermented culture of Ensifer meliloti MH16 applied against Candida albicans MJ34. Results of aligment of DNA sequencing of polymerase chain reaction (PCR) products of the partial sequence of the gene 16S rRNA of the tow selected rhizobial strains under study with standard strains recorded in the Gene Bank reaveled that IcI|Query-44061 isolate corresponded 97.27% with Rhizobium sp. BAB-3360 (KF984469.1) wherea (IcI|Query- 22739 ) isolate were corresponded 97% with Rhizobium leguminosarum strain RP1(KY940047.1).

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب