التقييم البكتريولوجي والجزيئي لأنواع بكتريا Cronobacter spp. المعزولة من حالات سريرية مختلفة لدى الأطفال دون السنتين من العمر في مدينة الموصل / العراق

الباحث

منتهى محمد صالح أحمد محمود العمري

المشرف

شاكر غازي جرجيس

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2024

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

بكتريا Cronobacter ; الأطفال ; التشخيص الجزيئي ; الحالات السريرية

شملت الدراسة جمع )150( عينة ] براز )60(، دم )60(، سائل النخاع الشوكي )30( [ سريرية من الأطفال دون عمر السنتين للمدة من (1/9/2023) إلى (1/12/2023) من مستشفيات مدينة الموصل (مستشفى إبن الاثير التعليمي ومستشفى الخنساء). لغرض Be وتشخيص أنواع Cronobacter إذ نقحت العينات على وسط أكار الماكونكي ثم أقحت المستعمرات التي أعطت اللون الوردي المخمرة لسكر اللاكتوز على وسط تريتون أكار الصويا ثم أكد التشخيص المظهري الأولي بالتلقيح على الوسط المولد للون Chromogenic media وشخصت العزلات جميعاً flac! على صفاتها المظهربة وباستخدام إختباري الكتاليز والأوكسديز.تم إستخدام جهاز الفايتك لتأكيد تشخيص الجنس حيث تم الحصول على (8) عزلات تعود للجنس Cronobacter أي بنسبة )%5.3( من مجموع العينات ، 4 )%6.6( عزلات من مرضى الالتهاب المعوي و4 )%6.6( عزلات مرضى تجرثم الدم، aly يتم الحصول على أي عزلة من مرضى السحايا باستخدام تقنية تفاعل سلسلة البلمرة،ء باستخدام الجين rRNA 165 تم الحصول على 4 )%2.6( سلالات تابعة للنوع 50024113 موزعة على عزلتين من )60( عينة أي بنسبة )%3.3( من عينات الدم وعزلتين من (60)عينة أي بنسبة )%3.3( من عينات البراز وشخصت عزلتين تابعة للنوع C. mulonaticus أي بنسبة( 3.3 %( من عينات البراز وعزلة واحدة أي بنسبة( %1.6( من عينات الدم لكل من النوعين C. pulveris 5 C. muytjensii وتم تأكيد التشخيص باستخدام جين تشخيصي آخر هو 7708 وتم تسجيل )5( سلالات (MUSHAS 5 MUSHA4; MUSHA35 MUSHA2; MUSHAI) في بنك الجينات العالمي Gen Bank بأرة قام الإنظمام OR825874 ) Accession Numbers (PP126445 ،PP126444 221264413 © على التوالي. تم إختبار حساسية العزلات أل (8) تجاه عدد معين من المضادات الحيوية وقدرتها على إنتاج أنزيمات البيتالاكتاميزء وأظهرت العزلات مقاومة لكل من Amoxicillin ، Cephalexin ، Lincomycin ،Erythromycin ،Doxycycline،Ampicillin—Cloxacillin، Cephalothin و بنسبة %100 وكانت حساسة لكل من Cefotaxime ، Ceftriaxone ، Azithromycin ، Levofloxacin sIrimethoprim—Sulfamethazole ،Gentamycin ،Chloramphenicol و Ampicillin-Clavulanic acid وينسبة )%100(- وأعطت مقاومة بنسبة )%63( لل Ampicillin (%50)s5 لمضاد Streptomycin ،Trimethoprim Glatad (%25),; Amikacin Nitrofurantoin ، وأبدت العزلات جميعاً القدرة على إنتاج أنزيمات بيتالاكتاميز. دُرست عوامل الضراوة المظهرية لأنواع Cronobacter فأظهرت جميع العزلات قدرتها على الحركة وينسبة )%100( وأنتجت أنزيمات haemolysin بنسبة )%88( أنزيم Protease بنسبة 333337 35_33 | أ[3 للك )%63( وينسبة )%25( لكل من Lecithinase s Lipase 5 )%12.5( لل Urease 5 )%0( للطبقة الغروية . تم التحري عن قدرة أنواع Cronobacter على إنتاج الغشاء الحيوي وأظهرت العزلات القدرة على إنتاج الغشاء الحيوي بطريقة الأنابييب بين )%75( شديدة التكوين 5 )%12.5( متوسطة التكوين 5 )%12.5( غير مكونة للغشاء الحيوي بينما أظهرت العزلات جميعاً القدرة على تكوين الغشاء الحيوي بطريقة صفيحة المعايرة الدقيقة فكانت )%75( شديدة التكوين، )%12.5( متوسطة التكوين و(9612.5) منها ضعيفة التكوين للغشاء الحيوي. دُرس تأثير درجات الحرارة المختلفة على نمو عزلات أنواع Cronobacter إذ أظهرت العزلات إنخفاضاً للنمو عند درجة الحرارة )50( م” مقارنة مع درجتي حرارة (25 و37) م”"، ودُرس تأثير الرقم الهيدروجيني على نمو العزلات جميعاً فلوحظ إنخفاض النمو البكتيري عند الرقم الهيدروجيني القاعدي (pH = 9) بالمقارنة مع الرقم الهيدروجيني الحامضي (4 = (pH والمتعادل (7 = (pH . أجري التحري عن بعض الجينات المشفرة لعوامل ضراوة أنواع Cronobacter باستخدام تقنية PCR فأظهرت السلالات جميعاً إمتلاكها للجينين ompA 5 zpx بينما أظهرت سلالات LQ! C.sakazakii لجيني الضروة 777 cpa s فيما تواجد الجين sip في سلالتي bt C.malonaticus . يتضمن المحور الأخير دراسة ضراوة Cronobacter LS داخل الجسم gall باستخدام الفثران الرضيعة، وذلك من خلال دراسة تأثير راشح السم المعوي المستخلص من عزلات C. sakazakii malonaticus 5 0 اذ أعطت سلالة واحدة من بكتريا C. sakazakii نتيجة إيجابية لتأثير السم المعوي. دُرس تأثير LAS الحية على الفئران الرضيعة المحقونة تحت الصفاق بتركيز )710( خلية/مل وتم ملاحظة خمول وانخفاض في الرضاعة وقلة الوزن وتغير لون الجلد ونفوق إثنان من الفئران المحقونة لسلالتين من .C. sakazakii خضرت المقاطع النسيجية من أعضاء (الكبدء الدماغ، الجزء السفلي للقناة المعدية المعوية) وفحصت تحت المجهر الضوئي المركب وتبين وجود ضرر في نسيج الكبد مع حدوث نخر وتفريغ للخلايا الكبدية وإحتقان الأوردة وتمددها. أظهرت المقاطع النسيجية للدماغ وجود وذمة وحيز محيط بالأوعية الدموية وإحتقانها وإحتقان الخلايا العصبية مع وجود بؤر إلتهابية وتنكس ونخر للخلايا العصبية لقشرة الدماغ . أظهر الجزء السفلي للقناة المعدية المعوية وجود خلايا إلتهابية مع تفريغ ونخر الخلايا المعوبة وتضخم الخلايا الليفية ووجود وذمة بين الزغابات .

A The study included the collection of (150) clinical specimens [ stool (60) , blood (60) , cerebrospinal fluid (30) ] from children under the age of two years for the period from 1/9/2023 to December 1/12/2023 from hospitals in the city of Mosul (Ibn Al-Atheer Teaching Hospital And Al-Khansa Hospital). For the purpose of isolating and identifing Cronobacter spp The specimens were selected and inoculated onto MacConkey Agar medium, then the colonies that gave the pink color were inoculated on Tryptone Soy Agar medium, then the initial phenotypic identify was confirmed by inoculation on the color- generating medium.(Chromogenic media). All isolates were identified based on their phenotypic characteristics and using the catalase and oxidase tests. The Vitek system was used to confirm the genus identify. Eight isolates of the genus Cronobacter were obtained, i.e. (5.3%) of the total specimens. (4) isolates (6.6%) were from patients with intestinal infections and (4) isolates (6.6%) were obtained from patients with bacteremia, and no isolates were obtained from patients with meningitis. Using polymerase chain reaction techniques and using 16S rRNA, (4) strains (2.6%) belonging to the species C. sakazakii were obtained, distributed among two isolates from (60) specimens, i.e. (3.3%) of the blood specimens, and two isolates from (60) specimens, i.e. (3.3%) of the stool samples, and two isolates belonging to the type were identified. C. mulonaticus, i.e.( 3.3%) of the stool specimens, and one isolate, i.e. (1.6%) of the blood specimens, for each of the two types: C. muytjensii and C. pulveris. The diagnosis was confirmed using another diagnostic gene, rpoB. (5) strains were recorded (MUSHA1, MUSHA2, MUSHA3, MUSHA4 and MUSHA5) in Gen Bank with accession numbers (OR825874, OR825875, PP126443, PP126444, PP126445) respectively. The sensitivity of the eight isolates to a certain number of antibiotics and their ability to produce β-lactamase enzymes were tested, and the isolates showed resistance to Cephalexin, Amoxicillin, Cephalothin, Ampicillin - Cloxacillin, Doxycycline, Erythromycin, Lincomycin at a rate of (100%) and was sensitive to Azithromycin, Ceftriaxone, Cefotaxime,Chloramphenicol, Gentamicin, Trimethoprim - Sulfamethazole , Levofloxacin and Ampicillin - Clavulanic acid at a rate of (100%). It gave (63%) resistance to Ampicillin , (50%) to Amikacin and (25%) to Trimethoprim, Streptomycin and Nitrofurantoin. All isolates showed the ability to produce β -lactamase enzymes. The phenotypic virulence factors of the species were detected. All Cronobacter isolates showed (100%) motility and produced enzymes B Heamolysin (88%), Protease enzyme (63%), Lipase and Lecithinase (25%), Urease (12.5%), and slime layer (0%). The ability of Cronobacter isolates to biofilm production has been detected, the isolates showed the ability to produce biofilm using the tube method, with (75%) being highly formed, (12.5%) moderately, and (12.5%) not producing to biofilm, while all isolates showed the ability to produced biofilm by using the microtiter plate method, so (75%) were highly forming, (12.5%). moderate biofilm formation and (12.5%) week biofilm formation. The effect of different temperatures have been studied on the growth of isolates of the species Cronobacter as (50)°C showed a decrease in growth compared to the temperature (25 and 37)°C. The effect of pH on the growth of all isolates was studied, and a decreased in bacterial growth was observed at the basic pH (pH = 9) compared to acidic (pH = 4) and neutral (pH = 7). An investigation was conducted for some genes encoding virulence factors of certain species Cronobacter using PCR technology showed that all strains possessed the zpx and ompA genes, while the C.sakazakii strains showed that they possessed the hly and cpa virulence genes, while the sip gene was present in C.malonaticus isolates only. The last axis includes studying the virulence of bacteria Cronobacter In vivo, using infant mice, by studying the effect of enterotoxin filtrate extracted from C. sakazakii and C. malonaticus isolates, as one strain of C. sakazakii bacteria gave a positive result for the effect of enterotoxin. The effect of live bacteria on infant mice injected intraperitonial at a concentration of (107) cells/ml was studied. Lethargy, decreased lactation, weight loss, change in skin color, and death of two mice injected with two strains of C. sakazakii were observed. Organs (liver, brain, lower part of the gastrointestinal tract) were dissected and taken. For histological study, tissue sections were prepared and examined under a compound light microscope. It was found that there was damage to the liver tissue, with necrosis and vaculation of the liver cells, congestion and expansion of the veins. Histological sections of the brain showed the presence of edema, perivascular space and congestion of nerve cells with the presence of inflammatory foci, degeneration and necrosis of neurons of the cerebral cortex, and the lower part of the gastrointestinal tract showed the presence of inflammatory cells with vaculation and necrosis of intestinal cells, hyperplasia of fibrous cells, and the presence of edema between the villi.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب