دراسة تعبير الجين TP73 ودوره بسرطان الثدي في مدينة الموصل

الباحث

نور مازن عبدالرحمن محمد علي عطارباشي

المشرف

أويس موفق حامد الحسني

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم علوم الحياة

الشهادة

دكتوراه

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

الجين TP73 ; سرطان الثدي ; التعبير الجيني ; مثيلة DNA

هدفت الدراسة إلى تحديد دور مثيلة DNA وتأثيرها على مستوى التعبير الجيني للجين 7773 لدى النساء المصابات بسرطان Grill في مدينة الموصل. شملت الدراسةالحالية 80 امرأة تراوحت أعمارهن بين(55-37) سنة من النساء السليمات من الأمراض والمصابات بسرطان ،(gail وللمدة من شهر كانون الثاني لغاية شهر أيلول لسنة 2022 ، وقُسمت العينات إلى مجموعتين، المجموعة الأولى وتضمنت 40 امرأة وجمعت بشكل عينة الدم من الاصحاءء أما المجموعة الثانية تضمنت 40 امرأة وجمعت بشكل عينة الدم والقطعة النسجية من المصابات بسرطان ،(gail وقسمت العينة إلى ثلاثة cola) الجزء الأول لإستخلاص الخآ1(8 والجزء الثاني لإستخلاص RNAS والجزء الثالث لإجراء الأختبارات الكيموحيودة. شم كشف عن التباينات الوراثية للجين 72773 في الموقعين (G4C14-A4T14) و (rs1801173) للجين 7273 بإستخدام تقنية Tetra-ARMS-PCR! ، و Gok تتابعات النيوكليوتيدات للقطع المضخمة بوساطة تقنية DNA-Sequencings) كما تم تحليل مستويات التعبير الجيني للجين 7273 بوساطة تقنية ال RT-PCR وقيست مثيلة DNA) في بادئ Primer الجين 3 .؛ وكذلك قيست بعض المؤشرات الكيموحيوية المرتبطة بالجين 72773 ولها تأثير على سرطان rill مثل بروتينات kinase C “PKC” ,Tumor Protein p73 “TP73”) طاعامءط و (p53 Upregulated Modulator Of Apoptosis “PUMA” بوساطة تقنية الاليزا. أظهرت نتائج نسب المشاهدة الأليلية و تكرار LLA الوراثية المختلفة للجين 7873 في الموقع Gal (G4C14-A4T14) مرضى أورام Grill بأن قيمة التكرار للطراز الوراثي الطبيعي Wild “GC/ GC” genotype كانت بنسبة %75 و هي النسبة الأعلى مقارنة بما ظهر في الطراز الوراثي المتغاير “GC/AT” Hetero genotype الذي كانت نسبته 7/15, اما الطراز الوراثي الطافر “AT/AT” Mutant genotype فكانت نسبته تعادل %10 وهو نادرء و إن نسبة التكرار الاليلي للاليل الطبيعي GC كانت مرتفعة 82.5 % مقارنة بالاليل الطافر AT بنسبة 17.5 9 . كما تبين Ol نسبة المشاهدة الحاصل عليها مع نسبة المشاهدة المتوقعة الناتجة من توازن هاردي وينبيرغ Hardy- “HWE” Weinberg Equilibrium تكون فيها قيمة 0.0023 = P-value وهي اقل من P= 5 وهذا يدل على أنها تخضع لقانون التوازن وان المؤثر هو بيئي، و له تأثير متنحي على الدراسة. كما أظهرت النتائج Gh نسبة الملاحظة الأليلية و تكرار الأنماط الوراثية المختلفة للجين TP73 في الموقع (751801173) al مرضى أورام الثدي بأن dad التكرار للطراز Abell الطبيعي والسليم “CC” Wild genotype كانت بنسبة %35 Lats ظهرت قيمة التكرار للطراز الوراثي الطافر “TT? Mutant genotype الذي تكون نسبته 9615. أما الطراز الوراثي “CT” shal) Hetero genotype فكانت نسبته تعادل %50 و هي النسبة الأعلى مقارنة بالطرز الأخرى. كما أظهرت نتائج الدراسة الحالية بأن نسبة تكرار الاليل الطافر كانت 40 96 وهي أقل مقارنة بنسبة 60 Jo 11م م للاليل الطبيعي . كما تبين بأن نسبة المشاهدة الحاصل عليها مع نسبة المشاهدة المتوقعة الناتجة من توازن HWE تكون فيها قيمة ال 0.79 = P-value ، وهذا يدل على أنها لا تخضع لقانون التوازن وأن المؤثر هو وراثي وله تأثير متنحيء ولايوجد تأثير سيادي لهذا التباين. أظهرت نتائج السكونس لدى المرضى لتضخيم جين ال7773 وجود إختلافات غير مسجلة مسبقاً في تسلسلات عدد من النيوكليوتيدات وشجل نمط وراثئي جديد للجين 7273 في مدينة الموصل في بنك الجينات العالمي ضمن المركز الوطني لمعلومات التقنيات الحياتية National “NCBI” Center Biotechnology Information ، و اعطي الرقم التعريفي له LC742131 GenBank: فضلاً عن تسجيل نمط مظهري جديد للبروتين الكابح للورم TP73 واعطي الرقم التعريفي له -GenBank: LC742132 أظهرت نتائج الاختبارات التابعة لعملية المثيلة في DNAM 54 محفز Promoter الجين TP73 بوجود ارتفاع في عملية المثيلة DNA Methylated في محفز الجين لدى المرضى مقارنة بالأصحاء في حين انخفضت قيمة ال gal DNA Un-Methylated المرضى مقارنة بالأصحاء . نتائج اختبارات التعبير الجيني أظهرت بأن هناك ارتفاع معنوي في مستويات التعبير الجيني لمرضى سرطان الثدي للنمطان الوراثيان )4.31( 1 Variant 7873 و )2.21( 2 TP73 Variant بينما يوجد انخفاض في مستوى التعبير الجيني للنمط الوراثي(3)0.71 Variant 72873 مقارنة مع مجموعة الاصحاء التي بلغت قيمتها 1. كما تبين من خلال نتائج الدراسة الحالية بأن النساء المصابات بسرطان الثدي ولديهم حالةالمثيلة 0 بنسبة 25 99 في بروموتر الجين 7273 كان لديهم انخفاضاً كبيراً جداً في مستوى التعبير الجيني للجين 7773 بأنماطه الثلاثة المختلفة )0.25 V2= 0.44 , V3= , 171-0.70). في Gas إن النساء اللواتي لديهن Semi Methylatedils بنسبة 40 % كان نسبة التعبير الجيني للجين 3 لديهن مرتفعة للأنماط الثلاث المختلفة مقارنة بحالات المثيلة المختلفة V2= 1.44 , V3=0.55) , 171-1.90). كما أظهرت نتائج الدراسة وجود انخفاض معنوي عند مستوى احتمالية 0.05 >7 لكل من المتغيرات الكيموحيوية المرتبطة بفعالية الجين 7273 فقد انخفض مستوى بروتين TP73 المشفر من قبل الجين لدى المرضى pg/ml) 3.5 + 106.9( مقارنة بمجموعة الاصحاء pg/ml) 12.4 + 176.4( وانخفض مستوى بروتين Gal PKC المرضى ng/ml) 0.92 + 10.3( مقارنة مع مجموعة الاصحاء ng/ml) 1.46 + 15.3( كذلك انخفض مستوى بروتين Gal PUMA المرضى ( 13.3 + 131.2 (pg/ml مقارنة مع مجموعة الاصحاء pg/ml) 17.4 + 176.2( .

A The current study aimed to determine the role of DNA methylation and it’s effects on the level of gene expression of the TP73 gene in women with breast cancer in Mosul city. The current study included 80 women, old age (37-55) years, 40 from healthy women and 40 affected with breast cancer: for the study conducted during January to September of 2022, the first group included 40 women and blood sample collected, the second group included 40 women and blood sample and tissue biopsy were collected from patients with breast cancer, and the sample was divided into three parts, the first part to extract DNA, the second part to extract RNA, and the third part to conduct biochemical tests. Then, genetic variations of the TP73 gene were detected in the two sites G4C14-A4T14 and rs1801173 using the Tetra-ARMS-PCR technique, and the nucleotide sequences of the amplified pieces were determined by DNA- sequencing, and the expression levels of the TP73 gene were analyzed by RT- PCR, the methylation of the DNA in the primer of the TP73 gene was measured, as well as some biochemical indicators associated with the TP73 gene and having an effect on breast cancer, such as Tumor Protein p73 ―TP73‖ , Protein kinase C ―PKC‖ and p53 Upregulated Modulator Of Apoptosis ―PUMA‖ proteins, by ELISA technique. The results showed that the allelic incidence and recurrence of different genotypes of the TP73 gene at the site G4C14-A4T14 in patients with breast tumors showed that the recurrence value for the normal and healthy wild genotype ―GC/GC‖ was 75%, which is the highest percentage. In the "GC/AT" hetero-genotype, which was 15%. As for the genotype mutant ―AT/AT‖, its rate was equivalent to 10% and it is rare. The allelic frequency of the natural allele GC was high 82.5% compared to the mutant allele AT by 17.5%. It was also found that the obtained result ratio with the expected result from the Hardy- Weinberg Equilibrium ―HWE‖ has a P-value = 0.0023, and this indicates that it B is subject to the law of balance H.W.E and that the influence is environmental, and this indicates that it has a recessive effect on the study. The results also showed that the percentage of allelic observation and recurrence of different genotypes of the TP73 gene at locus (rs1801173) in patients with breast cancer showed that the recurrence value of the normal and healthy wild genotype ―CC‖ was 35%, while the recurrence value of the mutant genotype ―TT‖ appeared. Which is 15%. As for the hetero genotype ―CT‖, the percentage was equivalent to 50%, which is the highest percentage compared to the other types. The results of the current study also showed that the frequency of the mutant allele was 40%, which is lower compared to 60% for the normal allele. It was also found that the obtained result ratio with the expected result from the HWE equilibrium has a P-value = 0.79, which is higher than P = 0.05, and this indicates that it is not subject to the law of balance H.W.E. and the effect is hereditary and has a recessive effect, and there is no dominant effect for this variance. The sequence results for the amplification of the TP73 gene in patients also showed the presence of previously unrecorded differences in the sequences of a number of nucleotides. A new genotype for the TP73 gene was recorded in the city of Mosul in the National Center for Biotechnology Information ―NCBI‖, and the identification number was given to it GeneBank: LC742131 In addition to recording a new phenotype of the p73 tumor suppressor protein, which was assigned the ID number GeneBank: LC742132. The results of tests related to the DNA methylation process in the primer of the TP73 gene showed that there was an increase in the methylated DNA in the gene promoter in patients compared to the control, while the value of un- methylated DNA decreased in patients compared to healthy. The results of gene expression tests also showed that there is a significant increase in the gene expression levels of patients with breast cancer of the genotype TP73 Variant 1 (4.31) and TP73 Variant 2 (2.21), while there was a slight decrease in TP73 Variant 3 (0.71) compared with the control group that was (1). It was also shown through the results of the current study that women with breast cancer and having 25% methylation in the TP73 gene promoter had a very significant decrease in the level of gene expression for the TP73 gene in its three different types (V1=0.70, V2=0.44, V3= 0.25). Whereas, women with semi-methylated status of 40% had a high percentage of TP73 gene expression for the three different types compared to the different methylation states (V3 = 0.55, V1 = 1.90, V2 = 1.44). The results of the study also showed that there was a significant decrease at the level of probability P ≤ 0.05 for each of the biochemical variables associated with the activity of the TP73 gene. The level of the TP73 protein encoded by the gene decreased in patients (106.9 ± 3.5 pg / ml) compared to the control group (176.4 ± 12.4 pg /ml), and the level of protein kinase C ―PKC‖ that activating TP73 protein decreased in patients (10.3 ± 0.92 ng/ml) compared to the healthy group (15.3 ± 1.46 ng/ml). Also, the level of p53 upregulated modulator of apoptosis ―PUMA‖, decreased in patients (131.2 ± 13.3). pg/ml) compared with the healthy group (176.2 ± 17.4 pg/ml).

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب