التشخيص المظهري والجزيئي لبكتريا Serratia marcescens من مصادرها السريرية والتحري عن قدرتها على التحفيز المناعي

الباحث

مروة إحسان خليل إبراهيم

المشرف

محمود عبد الجبار حسين الطوبجي - ريان مازن فيصل العبيدي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم علوم الحياة

الشهادة

دكتوراه

السنة

2024

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

بكتريا Serratia marcescens ; التشخيص الجزيئي ; التحفيز المناعي ; المصادر السريرية

تضمنت الدراسة الحالية جمع 152 عينة من حالات مرضية شملت (الحروق والجروح والتهاب المجاري البولية) للفترة من شهر شباط ولغاية حزيران 2023 من المرضى في مستشفى السلام التعليمي والموصل العام والجمهوري التعليمي مركز الموصل التخصصي للحروق والمعالجة التجميلية ومن كلا الجنسين وبأعمار مختلفة. هدفت هذه الدراسة إلى تحديد تأثير الخلايا البكتيرية ل S. marcescens الحية منها والمقتولة وراشح المزرعة البكتيرية على أنواع من الخلايا المناعية في بعض الأعضاء المناعية في المزارع الخلوية، إضافة إلى دراسة تأثيرها على التعبير الجيني لبعض العوامل المناعية في تلك المزارع الخلوية. وأظهرت النتائج أن أعلى نسبة عزل لبكتريا ال .ى 2525 كانت في حالة الإصابة بالتهاب المجاري البولية إذ بلغت 4.41 % بواقع ثلاث عزلات من 68 dic تلاها حالات من الحروق ثم الجروح وبنسبة 3.62 % و2.17 % على التوالي. وأكّد التشخيص باستخدام جهاز ال Vitek2 كما أظهرت السلالات المعزولة حساسية تجاه بعض المضادات الحيوية ومقاومة للبعض الاخر. وحدد التسلسل الوراثي للجين rRNA 165 للسلالات المعزولة لغرض تأكيد التشخيصء وأيضا لتحديد وجود سلالات جديدة للبكتريا من خلال تحديد التتابعات لل DNA وقد سجلت 3 سلالات بكتيرية من مجموع خمس عزلات في بنك الجينات الامريكي العالمي وبنسبة تتطابق بلغت 9699.86. كشفت الدراسة بعد التحليل الجيني لخمسة عزلات بكتيرية عن جينات عوامل الضراوة لل 77/4 في أريع عزلات وجين Aly في ثلاث عزلات ولم تظهر جينات باقي عوامل الضراوة. أظهرت الدراسة تحديد تأثير الخلايا البكتيرية الحية والمقتولة وراشح المزرعة البكتيرية على الخلايا المناعية في المزارع الخلوية لبعض الأعضاء المناعية، وأظهرت النتائج ارتفاعاً بأعداد الخلايا المناعية في الطحال والمعرضة للبكتريا الحية ويمقدار “1.210 خلية / مل بنسبة %500 مقارنة بالسيطرة في حين كان أعدادها “0.6<10 وينسبة بلغت 0 عند تعرضها للخلايا المقتولة و 0.5<107 عند تعرضها للراشح البكتيري وينسبة بلغت 0 في حين كان تأثير الخلايا الحية على الخلايا لمناعية في العقد اللمفاوية بمقدار 2.0x10° خلية / مل وبنسبة 993230 وكان بمقدار 1.1107 و 1.5107 خلية /مل وبنسبة )1730( و (2400) % على التوالي عند تعرضها للخلايا المقتولة وراشح المزرعة البكتيرية على التوالي، ومقارنة بعينات السيطرة التي بلغت تعداد الخلايا فيها بمقدار “0.6<10 خلية / مل. وظهرت أعداد الخلايا المناعية في نخاع العظم بمقدار متقارب عند تعرضها للخلايا الحية والمقتولة، وبلغ تقريبا 5.0<107 خلية /مل وينسبة ارتفاع بلغت 9542 مقارنة بعينات السيطرة، في حين كانت )— الخلاصة لللطلطئسسسسسح Cu أعدادها أقل عند تعرضها للراشح البكتيري أذ بلغ 4.0107 خلية / مل وبنسبة 9914.3 التي كان تعداد الخلايا فيها 3.5x10° خلية /مل وأظهرت نتائج التعبير الجيني لجينات CD3 و cd19 و GMCSF و NFKB و IL-6 لخلايا المزارع الخلوية المعرضة للخلايا الحية والمقتولة وراشح المزرعة البكتيرية اختلافات كبيرة مع عينات السيطرة، إذ كان تأثير البكتريا الحية على خلايا نخاع العظم بأعلى تعبير جيني لد CD3 ثم IL-6 وللعامل GMCSF ومن ثم لل CD19 وأخيرا للعامل 8" في حين كان تأثير الخلايا المقتولة بأعلى تعبير جيني لد IL-6 ومن ثم ل 013 و GMCSF و CD19 و NFKB على التوالي. كان تأثر راشح المزرعة البكتيرية في أعلى تعبير جيني للجين IL-6 ومن ثم لذ CD3 و CD19 و GMCSF و NFKB على التوالي . عند تعرض خلايا العقد اللمفاوية للمعاملة بالخلايا البكتيرية الحية وتحديد التعبير الجني أظهرت النتائج أن أعلى تعبير جيني كان للعامل GMCSF ويمقدار 30 ضعفاً وتلاها العامل NFKB بمقدار 15 ضعفاً ثم كل من CD3 و IL-6 بمقدار 11 ضعفاً وأخيرا ال 0719 بمقدار 5 أضعاف مقارنة بعينات السيطرة. Ll نتائج التعبير الجيني للخلايا المناعية في العقد اللمفاوية والمعرضة للبكتريا المقتولة فكان العامل 68 في أعلى تعبير جيني ومن ثم CD3 بمقدار 10 أضعاف ويمستوى متقارب لكل من 9 و IL-6 و GMCSF وكان للراشح البكتيري تأثير على التعبير الجيني للعامل GMCSF بمقدار 10 أضعافء ومن ثم بمقدار أقل لباقي العوامل المدروسة مقارنة بعوامل السيطرة .وظهر التعبير الجيني لل LEU GMCSF المناعية في الطحال والمعرضة للبكتريا الحية بأعلى مستوى بلغ بحدود 2000 ضعف ويفارق كبير عن التعبير الجيني لل CD19 الذي ظهر بمقدار 120 ضعفاً ومن ثم التعبير الجيني لل IL-6 و CD3 و NFKB بمقدار 60 و 45 و 25 ضعفاً على التوالي .ظهر تأثير الخلايا البكتيرية المقتولة على التعبير الجيني لكل من 01019 و 0103 و IL- 6 و NFKB بمقدار 90 و 40 و 40 و 25 ضعفاً على التوالي في حين ظهر التعبير الجيني للعامل GMCSF في الطحال بأعلى مقدار بلغ 1200 ضعف . وكان تأثير راشح المزرعة البكتيرية على التعبير الجيني للعامل GMCSF بأعلى مستوى له بلغ بحدود 400 ضعف في حين بلغ لل IL-6 و CD3 و 01019 و NFKB بمقدار 20 و 15 و 14 و 10 أضعافا على التوالي.

A The current study included the collection of 152 samples of disease cases including (burns, wounds and urinary tract infection) for the period from February to June 2023 from patients at Al-Salam Teaching Hospital, Mosul General and Al-Jumhuriya Educational Mosul Specialized Center for Burns and Cosmetic Treatment of both sexes and of different ages, this study aimed to determine the effect of live and dead S. marcescens bacterial cells and bacterial supernatant on the types of immune cells in some immune organs in cell cultures, in addition to studying their effect on the gene expression of some immune factors in those cell cultures. The results showed that the highest isolation percentage of S. marcescens was from urinary tract infection, accounting to 4.41%, with three isolates from 68 samples, followed by cases of burns and wounds, at a rate of 3.62% and 2.17%, respectively. Bacterial diagnosis was confirmed using the Vitek2 system, and the isolated strains showed sensitivity to some antibiotics and resistance to others. The 16S rRNA gene was used to identify the isolated strains for the purpose of confirming the diagnosis and also to determine the presence of new strains of bacteria by determining the DNA sequences. Three out of five bacterial strains were submitted to Gene Bank, all showing a identity rate of 98%. Genetic analysis of 5 bacterial isolates from this study revealed the presence of phlA virulence gene in 4 isolates and hly gene in 3 isolates, however, the genes for the rest of the virulence factors studied were not detected. The study showed a determination of the effect of live and dead bacterial cells and bacterial supernatant on immune cells in cell cultures of some immune organs. The results showed an increase in the number of immune cells in the spleen exposed to live bacteria by 1.2 x 104 cells/ml by 500% compared to the control, while their number was 0.6 x 104 with a rate of 200% when exposed to dead cells and 0.5 × 105 cells/ml, at a rate of (1730)% and (2400)%, respectively, when exposed to dead cells and bacterial supernatant, respectively, and compared with control samples in which the cell count reached 0.6 × 104 cells/ml. The number of immune cells in the bone marrow appeared at a similar rate when exposed to live and dead cells, reaching approximately 5.0 x 105 cells/ml, an increase of 42% B compared to control samples, while their numbers were lower when exposed to bacterial supernatant, reaching 4.0 x 105 cells/ml, a rate of 14.3%. The cell count was 3.5 x 105 cells/ml. The results of gene expression experiment for CD3, CD19, GMCSF, NFKB, and IL-6 in cell culture cells exposed to live and dead cells and bacterial supernatant showed significant differences with control samples, as the effect of live bacteria on bone marrow cells was with the highest gene expression for CD3, then IL-6 , and for the factor GMCSF, then for CD19, and finally for NFKB. While the effect of dead cells had higher gene expression for IL-6 and then for CD3, GMCSF, CD19, and NFKB, respectively. The bacterial supernatant caused an increase in gene expression for IL-6 followed by CD3, CD19, GMCSF, and NFKB, respectively. When lymph node cells were treated with live bacterial cells and gene expression was determined, the results showed that the highest gene expression was shown in GMCSF by 30-fold, followed by NFKB by 15-fold, then CD3 and IL-6 by 11fold, and finally CD19 by 5fold compared to control sample. As for the results of gene expression for immune cells in the lymph nodes exposed to dead bacteria, the gene expression for NFKB was highest, followed by CD3 by 10-fold, with a similar level for CD19, IL- 6 , and GMCSF. The bacterial supernatant had an effect on gene expression for GMCSF by 10-fold, and then to a lesser extent for the rest of the studied factors compared to the control factors. The gene expression of GMCSF of immune cells in the spleen exposed to live bacteria appeared at the highest level, reaching approximately 2000-fold, with a significant difference from the gene expression of CD19, which appeared at a rate of 120fold, and then the gene expression of IL-6 , CD3, and NFKB, at a rate of 60, 45, and 25fold, respectively. The effect of dead bacterial cells on the gene expression of CD19, CD3, IL-6 , and NFKB appeared to be increased 90, 40, 40, and 25fold, respectively, while the gene expression of GMCSF in the spleen appeared to be 1200 fold higher. The effect of the bacterial supernatant on the gene expression of GMCSF was at its highest level, reaching about 400-fold, while for IL-6 , CD3, CD19, and NFKB, it was 20, 15, 14, and 10-fold, respectively.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب