التشخيص الجزيئي لبكتريا Neisseria gonorrhoeae المعزولة من المرضى المصابين بالأمراض المنتقلة جنسياً وتأثيرها على التعبير الجيني لبعض الجينات المرتبطة بسرطان البروستات

الباحث

قاسم مصطفى خالد الدويرداني

المشرف

اميرة محمود محمد الراوي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم علوم الحياة

الشهادة

دكتوراه

السنة

2023

لغة الرسالة

انكليزي

الكلمات المفتاحية

Neisseria gonorrhoeae ; Sexually Transmitted Diseases ; Prostate Cancer ; Gene Expression

تناولت الدراسة الحالية اهتماما بالتحري عن جرثومة N. gonorrhoeae (N.gonorrhoede) والمسببات البكتيرية الاخرى للامراض المنقولة جنسيا من العينات المرضية والتي شملت 30 عينة من مسحات الاحليل و30 عينة ادرار من مرضى تم تشخيص اصابتهم بالامراض المنقولة جنسيا من قبل اطباء اختصاصيين بالاعتماد على الاعراض السريرية وتاريخ المرض للفترة من كانون الشاني 2ولغاية joi 2022 في محافظة دهوك . تضمن الجزء الاول slacks الطرق الروتينية للعزل والتشخيص باستخدام تقنية Vitek-2 عزل 6 و E. faecalis (E.faecalis) وينسبة %23.3 و %16.6 على التوالي. بالاضافة الى التحري عن المسببات البكتيرية باستخدام تقنية STD direct flow chip kit والتي بلغت Led نسبة العينات الموجبة 9663.3 ومن بين العينات الموجبة بلغت نسبة الاصابة بجرثومة Lain %15.7 N.gonorrhoea كانت اعلى نسبة اصابة 7665.3 لجرثومة = Ureaplasma LeSurealyticum (U. urealyticum) سجلت اقل نسبة اصابة 7965.1 لجرثومة Chlamydia. 15 ببينسا تفاوتنت نسب Lite) الموجبسة FES من Mycoplasma genitalium (M.genitalium) ، Mycoplasma hominis(M.hominis) وكانت 7615.7 و %10.5 على التوالي . فيما تناول الجزء الثاني تاكيد تشخيص العزلات الجرثومية جزيئيا باستعمال الجين .1651123814 حيث تم تسجيل سلالتين جديدتين في بنك الجينات N. gonorrhoeae strain QaAm-eul: NCBI IRAQ-2 accession number )( 1 و E. faecalis strain QaAm-IRAQ-1 and ON796012.1 code accession number لي يت ابا اع كما تم استخدام نظام BLAST و طريقة (neighbor-joining NJ لتحديد التشابه في التسلسل الجيني و رسم الشجرة التطورية للجرثومة المعزولة و اظهرت نتدائج العزلتين الجرثومية تطابق و بنسبة %99 لبكتر faecalis .[ودنسبة 100 % لبكترا GONORRHOEA .71 العديد من العزلات القياسية العالمية, فضلا عن ذلك تم التحري الجزيئي لبعض جينات الضراوة لجرثومة 2 وفي opa and por A genes باستخدام Cus Nested PCR أظهرر ت النتائج أن التسلسل الجيني لكلا الجينين موجودٍ وكان الوزن الجزيئي لكل من opa و (S59bp, por A 298bp) و 190bp) ,م5676) على التوالي . في الجزء GIL تم التحري عن التعبير الجيني لستة مؤشرات جينية لها علاقة بمؤشرات الاورام المناعية,بعد Alles بعض خلايا نسيج الحيوانات المختبرية بجرثومة N. gonorrhoede اظهرت نتائج التعبير الجيني باستخدام RT GPCR بواسطة برنامج prism software 1م013 وجود فروقات معنوية ذات دلالة إحصائية بين عينات زراعة الأنسجة المعاملة و غير المعاملة مع الجرثومة قيد الدراسة .حيث اظهرت جميع الجينات تعبيرا مابين واحد ونصف 1.5 - اكثر من خمسة عشر 15 ضعف واخيرا في الجزء الرابع درست فعالية وتاثير كل من نبات القرنفل clove (Syzigium aromaticum) والقرنفل المحمل على دقائق الفضة النانوية AgNPs على جرثومة N.gonorrhoede وخط الخلايا لسرطان البروستات PC3 والخلايا الطبيعية HdFn . كما تضمنت دراسة قابلية جرائيم N.gonorrhoede على تخليق Gils الفضة النانوية بالاعتمادعلى التغير اللوني من الاصفر الفاتح الى اللون البني وتم توصيف دقائق الفضة النانوية المخلقة Lys باستعمال تقنيات عدة شملت مطياف الاشعة فوق البنفسجية وطيف الاشعة تحت الحمراء وتقنية حيود الاشعة السينية والمجهر الالكتروني النافذ . بل ط يبي لحت ج - اظهرت نتائج تاثير مستخلص القرنفل على جراثيم N.gonorrhoeae ويطريقة الانتشار بالاقراص اعلى منطقة تثبيط بحدود 18 مليمتر وعند تركيز %100 من المستخلص النباتي بينما كانت منطقة التثبيط لمركب القرنفل النانوي اكبر وبحدود 26 مليمتر. وبينت النتائج تاثير مستخلص القرنفل على خط خلايا سرطان البروستات 203 فعالية وبنسبة تثبيط بلغت %45.3, %38.1, %24.1, %17.1, %15 وببالتراكيز 400 , 200, 100, 50, 25 مايكروغرام/ سم* على التوالي , فيما بينت نتائج تاثير القرنفل على الخلايا الطبيعية نسبة تثبيط تراوحت بين 9048.5 - 64.8,؟ عند التراكيز من 400 - 200 مايكروغرام / سم Lad. بلغت قيمة 1050 (140) مايكروغرام / سم على خط خلايا 203 بينما كانت قيمتها على خط الخلايا الطبيعية (142) مايكروغرام/سم .وعند اختبار مركب clove-AgNPs تبين ان له فعالية lel من مستخلص القرنفل لوحده ضد خط خلايا 203 اذ ثبطت LOAN بنسبة %58.2, 9048.4, %36.9, 918, 904.4 بالتراكيز 400, 200, 100, 50, 25 مايكروغرام/سم” على التوالي في حين لم يظهر المركب سمية خلوية عالية ضد خط الخلايا الطبيعية اذ تراوحت نسبة التثبيط بين 9033.3 - %4.2 وبالتراكيز 400 - 25 مايكروغرام/ سم* . فضلا عن ذلك اظهرت النتائج فروقا معنوية 0.0001 P< عند حساب قيمة 0 عند معاملة مركب القرنفل مع Las AgNPs خلايا PC3 67.44 مايكروغرام/ سمة والخلايا الطبيعية 132.5 مايكروغرام / سمة .

The current study focuses on detection of Neisseria gonorrhoeae (N. gonorrhoeae) and other sexually transmitted diseases (STDs) causing bacteria in 30 urethral swab and 30 urine specimens collected from STDs diagnosed patients depending on the clinical symptoms and disease history, the period between january 2022 to July 2022 in Dohuk city. The first part of this study includes the isolation of bacteria by classical methods and using Vitek-2 compact system for identification, where both N. gonorrhoeae and Enterococcus faecalis (E. faecalis) were isolated with the rate of 23.3% and 16.6% respectively, as well as direct flow chip kit for the detection of bacteria was used for the positive specimens 63.3% where the rate of infection with N. gonorrhoeae was 15.7% while the highest rate of infection was belongs to Ureaplasma urealyticum (U. urealyticum) 68.3%. At the same time Chlamydia trachomatis(C. trachomatis) represents only 5.1% of infections while both Mycoplasma hominis(M.hominis) and Mycoplasma genitalium (M.genitalium) represent 15.7% and 10.5% respectively. The second part includes the confirmation of bacterial identification molecularly depending on 16s rRNA where two new strains were submitted to NCBI genes bank with the strain name of N. gonorrhoeae strain QaAm-IRAQ- 2 accession number ON986776.1 and Enterococcus faecalis strain QaAm- IRAQ-1 accession number ON796012.1 . BLAST system with neighbor-joining (JB) methods were used to determine the similarities among gene sequence and creating the phylogenetic tree for the isolates. The results exhibited that both isolates were 99% identical to many international isolates. This study also included the molecular detection of two virulence genes opa and porA N. gonorrhoeae by using nested Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. The results show the presence of both genes . In the third part of this study the detection of gene expression of six different genes which are related to the immune oncogenes group was performed after treatment of laboratory animal cells with dead cells of N. gonorrhoeae, the results of gene expression by using Real Time Quantitative PCR and graph prism software exhibited the presence of statistical differences between N. gonorrhoeae treated and non-treated laboratory animal cells. All genes exhibited an expression between one and a half (1.5) to more than 15 (>15) change fold. Finally, the fourth part of our study includes the effects of clove (Syzigium aromaticum) and silver nanoparticles (AgNPs) conjugated clove on each of N. gonorrhoeae, prostate cancer cell line PC3 and normal cell HdFn. And the study consisted of studying the ability of N. gonorrhoeae isolates to biosynthesize the silver nanoparticles based on the colour change from pale yellow to brown. The biosynthetic silver nanoparticles were characterised using several techniques , including the ultraviolet spectrum (UV-vis), a fourier transform infrared spectroscope (FTIR), X- ray diffraction (XRD) and a transmission electron microscope (TEM). By disc diffusion method the results showed that the clove extract inhibited the growth of N. gonorrhoeae at a concentration of 100% with an inhibition zone of 8mm, while the inhibition zone created by AgNPs-clove compound was 13mm. The results also revealed that the rate of inhibitory activity of clove extract on PC3 cell line were 1.59%, 9.54 %, 1154 %, 4.54 % and 4.% at the concentrations of 400, 200, 100, 50 and 25 μg/ ml respectively. The rate of inhibition of clove on normal cells HdFn ranges from 48.5 % to 4.8% at the concentration of 400-200 μg/ ml, the IC50 value was 140 μg/ ml on PC3 cell line and 142 μg/ ml on the normal cell line. The results also show that the clove coated with AgNPs has higher activity against PC3 cell line than the clove extract alone as it inhibited the cells by ..51%, 1.51 %, 9.53 %, 4. % and 151% at the concentrations of 400, 122 , 422 , .2, 1. μg/ ml respectively. At the same time the clove coated with AgNPs showed a low cytotoxicity against normal cells where the inhibition rates were 33.3% -4.2% at the concentrations of 400 – 25 μg/ ml, as well as the results showed significant differences P<0.0001 by calculating the value of IC50 when the coated clove compound was applied to both PC3 cell line and normal cell at a concentration of 67.44 μg/ ml and 132.5 μg/ ml respectively.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب