عزل ودراسة جزيئية للبكتريا المتعايشة في أوراق وبذور نبات Ardisia crenata ودورها في البناء الحيوي لمركب Cyclic depsipeptide

الباحث

جيهان خليل خضر أحمد الجرجري

المشرف

أمجد عبد الهادي محمد علي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم / قسم علوم الحياة

الشهادة

ماجستير

السنة

2024

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

البكتريا المتعايشة ; نبات Ardisia crenata ; البناء الحيوي ; الدراسة الجزيئية

هدفت الدراسة الحالية الى التحري عن المحتوى البكتيري في العقد الورقية والثمار الحمراء لنبات Gus .470151 crenata أظهرت النتائج نمو نوعين بكتيريين بعد التحضين بدرجة 28 سيليزية لمدة 24 ساعة على وسط (NA) Nutrient agar وقد ظهرت المستعمرات لهما باللون الأصفر الفاتح واخذت الشكل الدائري المحدب قليلاً. وكانت كلتا العزلتين موجبتين لجميع الأختبارات والتي تضمنت صبغة كرام، اختبار الكاتاليز والأوكسديز. واظهرت البكتريا المعزولة من عقد الأوراق تحسسها لجميع المضادات الحيوية المستخدمة في هذه الدراسة اما البكتريا المعزولة من بذور الثمار أظهرت مقاومتها للمضادين Cefotaxime Ceftriaxone 5 بتركيز 10 مايكروغرام/ قرص لكل منهما وتحسسها لباقي المضادات الحيوية. شخصت العزلات جزيئياً بأستخدام تحليل التتابع الوراثي للجين .16511:374 وأضهرت النتائج عائدية العزلتين الى جنس Bacillus ومن 2 تسجيل العزلات في المركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية (NCBI) National Center for Biotechnology Information كسلالات awl sate Bacillus sp. strain JA Leaves وأعطيت الرمز PP213275.1 والأخرى بأسم Bacillus sp. strain JA seed وأعطيت الرمز PP215359.1 على التوالي. كذلك أشارت النتائج الى كفاءة تقانة الاقتران في التحول الوراثي لبكتريا Acinetobacter sp. strain 1 وانتقال صفة المقاومة للمضادات الحيوية وصفة تثبيت النيتروجين الجوي من البكتريتين المعزولتين ومن بكتريا 4/751 Acinetobacter sp. strain إلى البكتريا المقترنة Acinetobacter ونمو الأخيرة على الوسط الصلب الخالي من النيتروجين (NF) Nitrogen- free medium والحاوي على المضاد الحيوي Gentamicin بتركيز10 مايكروغرام/ مل. وأكدت الدراسة وجود جين nif H في بلازميدات الأنواع البكتيرية ad الدراسة في ضوء قراءات الترحيل الكهربائي لنواتج تفاعل PCR للحمض DNA البلازميدي المضخم والمستخلص منهم باستخدام (ah متخصص بالجين 11 /111. وقد نجحت الدراسة أيضاً في تكوين العقد الجذرية على المجموع الجذري لبادرات نبات البرسيم Trifolium spp. بعد معاملتها بالأنواع البكتيرية Acinetobacter baumannii strain JA لل يري يآ 1 © Conj.L المقترنة، Acinetobacter baumannii strain JA Conj.S المقترنة و Acinetobacter sp-strain AZS1 بعد 15:12 و18 Logs وبنسب مختلفة بلغت 78:86 و9966 وبمعدل تكوين للعقد بلغت 1.762.0 و 1.3 عقدة/نبات على التوالي. واثبتت مدة التلقيح 30 دقيقة تفوقها على الفترات الأخرى المستخدمة، وكذلك نجاح معاملة بذور نبات البرسيم بالانواع البكتيرية المذكورة سابقا ولمدة 20 play Adda على تكوين العقد الجذرية على المجموع الجذري للبادرات الناتجة من معاملة البذور بعد 25:23 و29 Lag; وبنسب بلغت 84: 76 %645 على التوالي، Shad عن ما تميزت بها الدراسة وهو Clad البكتريتين المقترنتين في احداث تشوهات على المجموع الخضري للبادرات الناتجة من البذور المعاملة وكانت التشوهات شبيهة بالعقد على طول الساق وبعضها قرب الأوراق. ونجحت الدراسة أيضا في نقل البلازميد الحامل للجينات المسؤولة عن انتاج مركب Cyclic 116210 هلمن البكتريتين المعزولتين الى Acinetobacter sp.strain AZS اثناء عملية الاقتران وذلك Sli على الكشف عن وجود هذا المركب في عينات مستخلصات المجموع الخضري لنبات البرسيم الملقح مجموعها الجذري وبذورها بالبكتريتين المقترنتين كل منها على حدى باستخدام تقانة كروماتوكرافيا السائل العالي الأداء واعطاء قيم مميزة للمركب تفوق تلك المتواجدة في النبات البري.

A The current study aimed to investigate the bacterial content in leaf nodules and red fruits of the plant, Ardisia crenata. The results showed the growth of two bacterial species after incubation at 28°C for 24 hours on nutrient agar. Their colonies appeared circular, slightly convex shaped light yellow in color. Both isolates were Gram positive and reacted positive to catalase and oxidase tests. The bacteria isolated from leaf nodules showed sensitivity to all antibiotics used in this study, while bacteria isolated from seeds showed resistance to cefotaxime and ceftriaxone at a concentration of 10 micrograms/ disk, and sensitive to the rest of the antibiotics. The isolates were identified through genetic sequence analysis of the 16S rRNA gene, and the results showed that the two isolates belonged to the genus Bacillus. The isolates were then submitted to the National Center for Biotechnology Information (NCBI) as new strains under the strain names Bacillus sp. strain JA Leaves and was given the accession number PP213275.1 while the other was named Bacillus sp. strain JA seed and given the accession number PP215359.1, respectively. The results also indicated the efficiency of conjugation technology in genetic transformation of Acinetobacter sp. strain AZS1 and the transmission of antibiotic resistance and atmospheric nitrogen fixation from the two isolated bacteria and from Acinetobacter sp. strain AZS1 to the associated bacteria Acinetobacter and the latter grew on nitrogen-free medium (NF) containing the antibiotic gentamicin at a concentration of 10 μg/ml. The study confirmed the presence of the nif H gene in the plasmids of the bacterial species understudy as confirmed by electrophoresis readings of the PCR reaction products of plasmid DNA extracted from them using a primer specialized for the nif H gene. B The study also succeeded in forming root nodules on Trifolium spp. seedlings roots after treatment with the bacterial species: conjugated Acinetobacter baumannii strain JA Conj.L, conjugated Acinetobacter baumannii strain JA Conj.S and Acinetobacter sp.strain AZS1 after 12, 15 and 18 days with different percentages reaching 86, 78 and 66% and with a rate nodules formation which reached 2.0, 1.7 and 1.3 nodules /plant, respectively. The inoculation period of 30 minutes proved superior to other periods used, as well as the success of treating Trifolium spp. seeds with the previously mentioned bacterial species for a period of 20 minutes through the formed of root nodules on seedlings roots resulting from seed treatment after 23, 25 and 29 days, with rates reaching 84,76 and 64%, respectively, in addition to the success of the two conjugated bacteria in causing deformities on the shoots of seedlings resulting from the treated seeds, the deformities were similar to nodules along the stem and some near the leaves. The study also succeeded in transferring a plasmid carrying the genes responsible for producing the cyclic depsipeptide compound, FR90035, from the two isolated bacteria to Acinetobacter sp. strain AZS during the conjugation process, based on the detection of the presence of this compound in samples of extracts from the shoot system of clover plants inoculated with the root system and seeds with the two conjugated bacteria separately, by using high-performance liquid chromatography technology giving distinctive values for the compound that exceed those found in the wild plant.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب