عزل وتشخيص مظهري وجزيئي لبكتريا Listeria spp. من الأغذية والعينات البيئية في محافظة نينوى

الباحث

هديل لؤي دوري الدوري

المشرف

رواء محمود حموشي

الجامعة

جامعة الموصل

الكلية / القسم

كلية العلوم البيئية / علوم البيئة

الشهادة

ماجستير

السنة

2023

لغة الرسالة

عربي

الكلمات المفتاحية

بكتريا الليستيريا ; التشخيص الجزيئي ; سلامة الأغذية ; العينات البيئية

جُمعت 144 عينة من مصادر غذائية وبيئية مختلفة تضمنت الخضار الورقية (كرافس ، لهانة و خس) ، ومنتجات الالبان المحلية (حليب جاموس طازج ، حليب بقر طازج وجبن محلي الصنع) ، ومنتجات اللحم (اللحم المثروم المجمد ، اللحم المثروم غير المجمد ، الصوصج والدجاج ) ، وعينات بيئية من تربة المزارع وماء السقي المأخوذ من النهر . رُرعت العينات على LLY) الزرعية الانتخابية المختلفة وقدز التعداد الكلي للبكتريا ولبكتريا القولون في عينات الاغذية وأظهرت النتائج أن أعلى قيمة للتعداد الكلي للبكتريا كانت في عينات gall المحلي )209 * 10° (CFU/ml ؛ في حين كانت أعلى قيمة. لبكتريا القولون )250 * ”10 (CFU/ml عينة الكرافس. فيما كانت أعلى قيمة للتعداد الكلي للبكتريا من العيناتٍ البيئية )196 * ”10 (CFU/ml لعينات ترية المزرعة و (119 * 10° (CFU/ml لعينات مياه السقي أما التعداد الكلي لبكتريا القولون كانت )178 * 10° (CFU/ml من عينات التربة الى (149 * 10° (CFU/ml لعينات cle السقي . اظهرت نتائج العزل والتشخيص Spe أنواع بكتيرية مختلفة من العينات المدروسة ومن ثم تم تشخيصها اعتماداً على الصفات المظهرية والمجهرية للمستعمرات والخصائص الكيموحيوية وبتقنية VITEK2 والمبينة بالنسب التالية : Staphylococcus (aureus 29.86%, saprophyticus 6.25% , lentus 4.86%), Kocuria kristinae 9.02%, Enterococcus (faecalis 28.4%, gallinarum 11.8%, cassliflavus 16.6%), Klebsiella spp. 13.1% , Bacillus spp. 15.2% , Shigella spp. 13.8% , Escherichia coli. 68.05%, Proteus spp. 34.02% , Salmonella spp. 9.02% , بلغت النسبة المئوية للبكتريا الموجبة لصبغة كرام 68.75 والسالبة .Streptococcus spp. 9.7% لصبغة كرام %31.25. بينت نتائج عزل وتشخيص جرثومة الليستريا من العينات قيد الدراسة بإستخدام اذ تم تشخيص 19 عزلة Hichrome-listeria selective agar base الوسط الزرعي الإنتقائي مظهريا ومجهريا وبالفحوصات الكيموحيوية والتشخيص الجزيئي وخضعت لإختبارات الحساسية بت ببدلللللب ب 3 1 >6 للمضادات الحيوية. أظهرت النتائج أن 4 عزلات تعود للنوع monocytogenes ..1آ بنسبة )%2.7( و15 عزلة من النوع welshmeri .1 بنسبة )%10.4( من إجمالي العينات المدروسة. أجري التشخيص الجزيئي الجيني بتقنية تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) لعزلات بكتريا الليستريا لتضخيم القطعة الجينية rRNA 165 )1495 زوج قاعدي) ل 5 عزلات حيث اعطت جميعها نتيجة موجبة. تمت مقارنة التتابعات النيوكليوتيدية من منطقة الجين rRNA 165 لأربع عزلات مع سلالات عالمية مسجلة في بنك الجينات العالمي (NCBI) و اظهرت النتائج ان عزلة واحدة تعود ل L. monocytogenes و ثلاث عزلات تعود لبكتريا الليستريا من النوع L. welshmeri . بلغت نسبة التطابق لتتابع التسلسلات لجين 16S rRNA لبكتريا L. monocytogenes )%99.17( مع عزلة اليابان ، Gals نسبة التطابق للعزلات البكتيرية الثلاثة لبكتريا L. welshmeri بين )%99-96( مع العزلات العالمية في كل من بولندا والصين والبرازيل وتركيا والمانيا. تم تسجيل تتابعات الجين rRNA 165 في بنك الجينات العالمي (NCBI) تحت ارقام الانضمام [00378323.1] و لبكتريا ada 1. welshmeri تحت ارقام الانضمام [00378325.1 ,000378322.1 ,00378324.1]. احتوت العزلات على جينات الضراوة aly actA, iap, plcA تحتو على جينات الضراوة 7454 Aly, sx, تباينت نتائج حساسية العزلات التابعة لليستريا تجاه المضادات الحيوية إذ اظهر المضاد الحيوي Erythromycin حساسية البكتريا له فكان أعلى قطر للتثبيط )28( ملم لبكتريا L. welshmeri وكانت مقاومتها كبيرة تجاه المضادات الحيوية Ceflexin, Chloramphenicol, Co-Trimozole, Oxacillin, Cephalothin, .Pencillin-G بكتريا LZ. monocytogenes كانت حساسة للمضادات الحيوية المستعملة وخصوصا المضاد الحيوي Tetracycline في حين كانت مقاومة للمضاد الحيوي Erythromycin .

A 144 samples were collected from different food and environmental sources, including leafy vegetables (celery, cabbage and lettuce), local dairy products (fresh buffalo milk, fresh cow's milk and local cheese), meat products (frozen minced meat, meat (non-frozen minced meat, sausage and chicken) and environmental samples from farm soil and irrigation water taken from the river. The isolates were purified on different culture media, and the total number of aerobic bacteria and the total number of coliform bacteria were estimated from food, and environmental samples. The results showed that the highest value of the total bacterial count was in the local cheese samples (209 * 105 CFU/ml) ; While the highest value for coliform bacteria (250 * 105 CFU/ml) was in the celery sample. The highest value for the total bacterial count from the environmental samples was (196 * 105 CFU/ml) for farm soil samples and for irrigation water samples (119 * 105 CFU/ml). while the total count (for coliform bacteria) was (178 * 105 CFU/ml) from Soil samples to (149 * 105 CFU/ml) for irrigation water samplesDifferent bacterial species were isolated from the studied samples and identified by phenotypic, microscopic methods and using VITEK2 technique, such as Staphylococcus (aureus 29.86% , saprophyticus 6.25% , lentus 4.86%), Kocuria (Rothia) kristinae 9.02% , Enterococcus (faecalis 28.4%, gallinarum 11.8% , cassliflavus 16.6%), Klebsiella spp. 13.1% , Salmonella spp. 9.02% , Bacillus spp. 15.2% , Shigella spp. 13.8% , Escherichia coli. 68.05% , Proteus spp. 34.02% , Streptococcus spp. 9.7% . The percentage of Gram-positive bacteria was 68.75% and Gram-negative bacteria was 31.25%. Listeria spp. was isolated from the study samples using selective culture media (Hichrome-Listeria selective agar base). Listeria spp. was diagnosed externally (naked eyes), microscopically, biochemically, molecularly, and underwent antibiotic sensitivity tests. L. monocytogenes was identified in 4 samples with a rate of (2.7%) of the total isolates` samples and L. welshmeri was identified in 15 samples with a rate of (10.4%) of the total isolates` samples. B Molecular Genetics Testing of Listeria spp. was carried out by extracting DNA from the studied samples, which included meat samples, dairy samples, leafy vegetable samples, and environmental samples, by using a Genomic DNA mini kit, a polymerase chain reaction (PCR) was performed to amplify the 16S rRNA gene segment gene (1495 base pairs) for 5 local isolates, all of which gave a positive result. The nucleotide sequences of the 16S rRNA gene region of four isolates were compared with international reference strains registered in the International Gene Bank (NCBI), where the results showed that there is one isolate belonging to L. monocytogenes and three to L. welshmeri. The L. monocytogenes match ratio of the sequence of the 16S rRNA gene was (99.16%) with the Japanese isolate, while the match rate of the same L. welshmeri gene for the three isolates of L. monocytogenes ranged between (96-99%) with the global isolates in Poland, China, Brazil, Turkey, and Germany. The new 16S rRNA gene sequences of L. monocytogenes were registered in the International GenBank under accession number [OQ378323.1], and for the three L. welshmeri isolates under accession numbers iap, plcA, actA and did not contain virulence genes hly, IIsx, ptsA. The results of the antibiotics used in the study varied, as the highest diameter of inhibition was (28) mm for the antibiotic Erythromycin at a concentration of (15) micrograms on L. welshmeri bacteria, which were resistant to antibiotics, such as Cefalexin, Chloramphenicol, Penicillin-G, Cephalothin, Oxacillin, and Co-Trimoxazole. While the highest inhibition diameter was (25) mm for L. monocytogenes, which was resistant to Tetracycline antibiotic and was resistant to Erythromycin.

طلب نسخة من الملف

الملفات غير منشورة على الموقع. اترك بياناتك وسيتواصل معك موظفو قسم الشؤون الثقافية والفنون لإرسال النسخة مجاناً.

الاسم

رقم الهاتف

البريد الإلكتروني

الغرض من الطلب (اختياري)

إرسال الطلب